[發明專利]一種發酵生產非達霉素的方法

有效

• 申請號: 201310488580.9
• 申請日: 2013-10-18
• 公開（公告）號: CN104561198B
• 公開（公告）日: 2019-04-12
• 發明（設計）人: 別一;羅永莎;唐恒;袁建棟
• 申請（專利權）人: 重慶乾泰生物醫藥有限公司;博瑞生物醫藥（蘇州）股份有限公司
• 主分類號: C12P19/62
• 分類號: C12P19/62;C12R1/01
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種發酵生產非達霉素的方法。在發酵生產非達霉素的過程中，通過向發酵液中添加食用油的方式，提高目標產品的產率，當發酵液溶氧由最低點開始回升時，開始間歇型或連續型添加食用油。該方法使操作簡單，條件溫和，原材料來源廣泛，設備要求低，降低了生產成本，并且大大提高了發酵產量，適合工業化生產。

技術領域

本發明涉及微生物發酵生產抗生素技術領域，具體涉及非達霉素的發酵生產。

背景技術

非達霉素（fidaxomicin）是由Optimer公司研發的一種新型窄譜的大環內酯類抗生素，商品名為Dificid，主要用于治療艱難梭菌相關性腹瀉(CDAD) ，于2011年5月27日獲FDA批準上市。與目前主要的治療藥物甲硝唑與萬古霉素相比，非達霉素能顯著降低復發率。非達霉素結構式如下：

非達霉素的制備主要由放射菌類桔橙指孢囊菌(Dactylosporangiumaurantiacum)經發酵過程產生。目前國內外關于非達霉素發酵工藝方面報道很少。CA1040564、GB1458512、US3978211中涉及發酵的部分工藝過于簡化，培養基缺乏遲效碳氮源，發酵效果不佳。美國專利US20100028970中提到了發酵的相關碳氮源與微量元素，并涉及到了發酵過程中使用含葡萄糖、無機鹽、氨基酸及酵母提取物的培養基，但是上述發酵方法仍然存在操作繁雜，發酵產物收率低的問題，隨著全球市場對抗生素的需求不但增長，因此需要能提高非達霉素發酵單位的效果顯著的改進方法。

發明內容

本發明的目的在于，針對現有非達霉素發酵工藝存在的不足，基于微生物生長動力學基礎，提供一種能夠提高非達霉素收率的液體發酵方法，其技術方案如下：

1）在種子培養基中培養營養體接種物；

所述的種子培養基配制方法：

葡萄糖20g/L，可溶性淀粉30g/L，酵母提取物5g/L，蛋白胨5g/L，硫酸鎂2 g/L，氯化鈉2g/L，碳酸鈣2g/L，PH7.0。

配制適量的種子培養基，120℃滅菌30min后冷卻至27-29℃，按種子培養基體積比0.1-0.3%的接種量接入48h種齡的搖瓶種子，然后27-29℃培養28-36h。

2）在發酵培養基中發酵積累非達霉素；

所述的發酵培養基配制方法：

葡萄糖20g/L，可溶性淀粉50g/L，酵母粉10g/L，蛋白胨5g/L，黃豆粉20g/L，硫酸鎂2 g/L，氯化鈉2g/L，磷酸氫二鉀1g/L,碳酸鈣2g/L，PH7.0。

配制適量的發酵培養基，120℃滅菌30min后冷卻至27-29℃，按發酵培養基體積比4-8%的接種量接入步驟1）種子培養基中的營養體接種物，發酵過程中控制溫度在27-29℃，控制壓力在0.04-0.06Mpa，控制通氣在0.5-1.5VVM，控制轉速在100-250rpm，溶氧電極在線監測，以確保溶氧在30%以上（假設發酵罐初始溶氧為100%）。

將發酵培養持續進行，48-72h間發酵罐中溶氧量降至最低點，當發酵液溶氧由最低點開始回升時開始添加食用油，并持續發酵，發酵160h后停止添加食用油，發酵180h之后，效價不再增長時停止發酵，獲得產物。

所述的添加食用油選自大豆油、玉米油、菜籽油、芝麻油、橄欖油、花生油或葵花籽油，或其中幾種任意的組合。

所述的食用油的配制：將食用油倒入補料罐內，120℃滅菌30min，待用。

所述的食用油添加，以24小時為一個時間單位，每個時間單位添加與發酵液體積比為0.5%-1.2%的食用油，添加方式為連續型或間斷型。

優選地，每個時間單位添加食用油的量為發酵液體積的1.0%。