[發明專利]茶葉中兒茶素類含量的檢測方法

有效

• 申請號: 201310485392.0
• 申請日: 2013-10-16
• 公開（公告）號: CN103940920A
• 公開（公告）日: 2014-07-23
• 發明（設計）人: 周順珍;龔雪;周國蘭;郭燦;鄭文莉
• 申請（專利權）人: 貴州省茶葉研究所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 貴陽中新專利商標事務所 52100
• 代理人: 李亮;程新敏

技術領域

本發明涉及一種茶葉科學領域，特別是一種茶葉中兒茶素類含量的檢測方法。?

背景技術

現在，普遍廠家的C₁₈(粒徑5um?，250mm×4.6mm?)色譜柱不能分離EGCG和EC，這也是多家實驗室反映的問題。經咨詢標準起草人，也說是柱子的問題，推薦買大連依利特Hyspersil?ODS2??C₁₈(粒徑5um?，250mm×4.6mm?)色譜柱后，標樣基本上可以分開，但也不是很理想，而樣品的分離效果就更差一些。且在EGC和+C色譜峰的右側或者左側出現一干擾峰，致使其分離度降低，峰形不對稱，拖尾嚴重，給積分造成較大誤差。?

現有的方法中，用穩定液配制的標樣工作液分離效果不如用水的好，且不能保存較長時間。而且用穩定液配制測試液容易污染排氣閥濾心，造成堵塞。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是：提供一種茶葉中兒茶素類含量的檢測方法，它能將標樣工作液或樣品測試液中的多種化合物完全分離，且分離效果良好，色譜峰的保留時間重現性也相對較好，以克服現有技術的不足。?

本發明的是這樣實現的：茶葉中兒茶素類含量的檢測方法，包括如下步驟:

1）將待測茶葉磨碎，將磨碎的茶葉加入70℃的質量百分比為70%的甲醇溶液中，將溶液攪拌均勻后，在70℃的水浴中進行浸提，使浸提溶液自然冷卻至室溫；將冷卻后的浸提溶液進行離心提取，取上清液；再將離心提取的殘渣重復上述步驟進行提取，將提取液合并搖勻，進行過濾后，獲得母液備用；

2）將母液加水定容后，進行過濾，獲得測試液；然后將測試液按照色譜條件為90～80%A相、10～20%?B相-->10～15min內由90～80%A相→80%～75%A相、20～25%B相-->20～25min內由80%～75%A相A相→70%～60A相、30～40%B相-->25～30min內由70%～60A相→90～80%A相、10～20%?B相-->90～80%A相、10～20%?B相保持5min，進行色譜分析，待壓力和柱溫穩定后，進行空白運行；準確吸取混合標準系列工作液注射入HPLC，在相同的色譜條件下注射與標準系列工作液相同體積的測試液；測試液以峰面積定量；流動相A為水，流動相B為N，N二甲基甲酰胺、甲醇及乙酸的組合為，N，N二甲基甲酰胺、甲醇及乙酸之間的體積比為35～45：1.5～2.5：1.5～2。

3）將測試的結果帶入公式（1）計算獲得兒茶素含量。

式中：C1表示標樣濃度%；A表示標樣峰面積、V表示樣品提取液體積ml；fstd表示所測成分的校正因子（濃度/峰面積，濃度單位為μg/ml）、d表示稀釋因子（通常為2ml稀釋成10ml，則稀釋因子為5）；m₁表示取樣量g；m表示樣品的干物質含量%。

步驟1）中所述的浸提的時間為10分鐘，每隔5分鐘進行一次攪拌。

步驟1）中所述的離心提取的轉速為3500r/min?，提取時間為10分鐘。

步驟1）及步驟2）中所述的過濾采用0.45μm膜進行過濾。

所采用的液相色譜柱的型號為?C₁₈，粒徑為5μm，250mm×4.6mm或粒徑為5μm，150mm×4.6mm。

本發明采用水來代替穩定溶液來配置測試液及標樣工作液，提高了測試液及標樣工作液分離效果，使基本上可以回到基線，且可以保存的時間較長，保存在-4℃條件下，至少半年以上。而且無論是標樣工作液還是測試液，都能將其中八種化合物（這八種化合物包括國標要求的七種）完全分離，且分離效果良好。色譜峰的保留時間重現性也相對較好。并且，有效避免了現有采用穩定液存在的容易污染排氣閥濾心、造成堵塞的問題。還通過改進色譜條件，提高了液相色譜柱的選擇范圍。

附圖說明：

附圖1為本發明的色譜條件。

具體實施方式：

本發明的實施例：茶葉中兒茶素類含量的檢測方法，

1?原理：

茶葉磨碎試樣中的兒茶素類用質量百分比為70%的甲醇溶液在70℃水浴上提取，兒茶素類的測定用C₁₈柱、檢測波長278nm、梯度洗脫、HPLC分析，用兒茶素類標準物質外標法直接定量。

2儀器：

2.1分析天平：感量0.0001g。

2.2水浴；70℃±1℃。

2.3離心機：轉速3500r/min。

2.4混勻器。