[發明專利]檢測腮腺炎病毒的方法及量子點標記免疫層析試紙及其制備方法

有效

• 申請號: 201310485259.5
• 申請日: 2013-10-16
• 公開（公告）號: CN103529216A
• 公開（公告）日: 2014-01-22
• 發明（設計）人: 文德敏;申有長;于曉永
• 申請（專利權）人: 北京華衛驥生物醫藥有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 北京匯信合知識產權代理有限公司 11335
• 代理人: 吳甘棠

技術領域

本發明涉及醫學免疫檢測方法，特別是涉及使用量子點標記免疫層析試紙，以免疫學的方法檢測腮腺炎病毒的方法。

背景技術

腺炎病毒（mumps?virus）是流行性腮腺炎的病原體，屬副粘病毒科。腮腺炎病毒為球形，核衣殼呈螺旋對稱，有包膜。包膜上有血凝素-神經氨酸酶刺突（HN）和融合因子刺突（F）。基因組為單負鏈RNA.腮腺炎病毒可在雞胚羊膜腔或雞胚細胞中增殖，可出現細胞融合，但細胞病變不明顯。腮腺炎病毒僅有一個血清型。抵抗力較弱，在56℃時30分鐘可被滅活，對紫外線及脂溶劑敏感。人是腮腺炎病毒惟一宿主，病毒經飛沫傳播，易感者為學齡期兒童，好發于冬春季節。本病潛伏期約2～3周，病毒侵入呼吸道上皮細胞和局部淋巴結內增殖后，進入血流，然后經血流侵入腮腺及其它腺體器官如睪丸、卵巢、胰腺、腎臟和中樞神經系統等。臨床表現主要為一側或雙側腮腺腫大，伴發熱、乏力、肌肉疼痛等。病程1～2周，青春期感染者易并發睪丸炎（20%）或卵巢炎（5%），約0.1%的患兒可并發病毒性腦膜炎。并發睪丸炎者可導致男性不育癥，腮腺炎也是導致兒童期獲得性耳聾的常見原因。腮腺炎病后可獲牢固的免疫力。

目前，常用的檢測方法是膠體金法，此法雖然檢測快速簡便，容易操作，但是準確率較低，靈敏度也較低。因此尋求一種價格便宜、操作簡便、靈敏度和特異性都較高的檢測方法是迫切需要解決的問題。

發明內容

針對上述技術的不足之處，本發明提供一種價格便宜、操作簡便、靈敏度和特異性都較高的檢測試紙以及用該試紙檢測腮腺炎病毒的方法。

一種量子點標記免疫層析試紙，設有塑料板、硝酸纖維素膜、玻璃纖維素膜A、量子點標記腮腺炎病毒IgG單克隆抗體的玻璃纖維素膜B、吸水紙；

其中，所述塑料板上依次粘貼有玻璃纖維素膜A、量子點標記腮腺炎病毒IgG單克隆抗體的玻璃纖維素膜B、硝酸纖維素膜、吸水紙；

其中，所述硝酸纖維素膜一端有腮腺炎病毒多克隆抗體和兔抗鼠二抗，以此形成檢測帶T和質控帶C；

其中，所述量子點標記的腮腺炎病毒IgG單克隆抗體位于玻璃纖維素膜B的一端，與檢測帶T和質控帶C相對應，并且量子點標記的腮腺炎病毒IgG抗體位于進樣點一端。

優選的，所述量子點為CdTe/ZnSe核殼量子點。

優選的，所述塑料板為粘性PVC底板。

優選的，所述腮腺炎病毒多克隆的濃度為0.5g/L。

優選的，所述兔抗鼠二抗的濃度為1.0g/L。

優選的，所述檢測帶T和質控帶C間距不少于5mm。

如上所述的試紙的制備方法，包括如下步驟：

（1）量子點與腮腺炎病毒IgG單克隆抗體的偶聯：

取0.01M的PBS緩沖液100～200uL與5～20uL表面連有羧基的量子點；

選取偶聯試劑，偶聯試劑選自羥基硫代琥珀酸亞胺、1-（3-二甲基氨丙基）-3乙基碳二胺鹽酸鹽；

加入腮腺炎病毒IgG單克隆抗體150～200uL；

搖床反應1～4小時；

層析柱過濾，離心純化；

用1%～5%的牛血清白蛋白封閉；

4℃保存；

（2）試紙的制備：

用0.05～0.15M的PBS緩沖液稀釋腮腺炎病毒多克隆抗體及兔抗鼠二抗，將0.5g/L腮腺炎病毒多克隆抗體和1.0g/L兔抗鼠二抗噴在硝酸纖維素膜一端，形成檢測帶T和質控帶C，T帶和C帶間隔5mm，室溫晾干，將硝酸纖維素膜放入PBS緩沖液中，37℃封閉待用，或者干燥后4℃保存；

將量子點標記腮腺炎病毒IgG單克隆抗體均勻噴覆于玻璃纖維膜B一端，與形成的T帶和C帶相對應，室溫干燥，4℃保存；

在塑料板上依次粘帖玻璃纖維素膜A、量子點標記腮腺炎病毒IgG單克隆抗體的玻璃纖維素膜B、硝酸纖維素膜、吸水紙；

用試紙切刀切割成試紙，干燥后密封保存。

用所述的試紙檢測腮腺炎病毒，包括如下步驟：將樣品點樣在組裝好的試紙上接近腮腺炎病毒單克隆IgG抗體的一端，反應5min后，在紫外分析儀中觀察結果。