[發(fā)明專(zhuān)利]檢測(cè)肺炎支原體的方法及量子點(diǎn)標(biāo)記免疫層析試紙及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310484852.8
• 申請(qǐng)日: 2013-10-16
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103529212A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-01-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 文德敏;申有長(zhǎng);于曉永
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 北京華衛(wèi)天和生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/577
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/577;G01N33/531
• 代理公司: 北京匯信合知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11335
• 代理人: 吳甘棠

1.一種量子點(diǎn)標(biāo)記免疫層析試紙，其特征在于，設(shè)有塑料板、硝酸纖維素膜、玻璃纖維素膜A、量子點(diǎn)標(biāo)記肺炎支原體IgM單克隆抗體的玻璃纖維素膜B、吸水紙；

其中，所述塑料板上從下到上依次粘貼有玻璃纖維素膜A、量子點(diǎn)標(biāo)記肺炎支原體IgM單克隆抗體的玻璃纖維素膜B、硝酸纖維素膜、吸水紙；

其中，所述硝酸纖維素膜一端有肺炎支原體多克隆抗體和兔抗鼠二抗，以此形成檢測(cè)帶T和質(zhì)控帶C；

其中，所述量子點(diǎn)標(biāo)記的肺炎支原體IgM單克隆抗體位于玻璃纖維素膜B的一端，與檢測(cè)帶T和質(zhì)控帶C相對(duì)應(yīng)，并且量子點(diǎn)標(biāo)記的肺炎支原體IgM單克隆抗體位于進(jìn)樣點(diǎn)一端。

2.如權(quán)利要求1所述的量子點(diǎn)標(biāo)記免疫層析試紙，其特征在于，所述量子點(diǎn)為CdTe/ZnSe核殼量子點(diǎn)。

3.如權(quán)利要求1所述的量子點(diǎn)標(biāo)記免疫層析試紙，其特征在于，所述塑料板為粘性PVC底板。

4.如權(quán)利要求1所述的量子點(diǎn)標(biāo)記免疫層析試紙，其特征在于，所述肺炎支原體多克隆抗體的濃度為0.5g/L。

5.如權(quán)利要求1所述的量子點(diǎn)標(biāo)記免疫層析試紙，其特征在于，所述兔抗鼠二抗的濃度為1.0g/L。

6.如權(quán)利要求1所述的量子點(diǎn)標(biāo)記免疫層析試紙，其特征在于，所述檢測(cè)帶T和質(zhì)控帶C間距不少于5mm。

7.如上任意一項(xiàng)權(quán)利要求所述的量子點(diǎn)標(biāo)記免疫層析試紙的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）量子點(diǎn)與肺炎支原體IgM單克隆抗體的偶聯(lián)：

取0.01M的PBS緩沖液100～200uL與5～20uL表面連有羧基的量子點(diǎn)；

選取偶聯(lián)試劑；

加入肺炎支原體IgM單克隆抗體150～200uL；

搖床反應(yīng)1～4小時(shí)；

層析柱過(guò)濾，離心純化；

用1%～5%的牛血清白蛋白封閉；

4℃保存；

（2）試紙的制備：

用0.05～0.15M的PBS緩沖液稀釋肺炎支原體多克隆抗體及兔抗鼠二抗，將0.5g/L肺炎支原體多克隆抗體和1.0g/L兔抗鼠二抗噴在硝酸纖維素膜上，形成檢測(cè)帶T和質(zhì)控帶C，T帶和C帶間隔5mm，室溫晾干，將硝酸纖維素膜放入PBS緩沖液中，37℃封閉待用，或者干燥后4℃保存；

將量子點(diǎn)標(biāo)記的肺炎支原體IgM單克隆抗體均勻噴覆于玻璃纖維膜B上，室溫干燥，4℃保存；

在塑料板上依次粘帖玻璃纖維素膜A、量子點(diǎn)標(biāo)記肺炎支原體IgM單克隆抗體的玻璃纖維素膜B、硝酸纖維素膜、吸水紙；

用試紙切刀切割成試紙，干燥后密封保存。

8.如權(quán)利要求7所述的量子點(diǎn)標(biāo)記免疫層析試紙的制備方法，其特征在于，步驟（1）中的偶聯(lián)試劑選自羥基硫代琥珀酸亞胺、1-（3-二甲基氨丙基）-3乙基碳二胺鹽酸鹽。

9.用權(quán)利要求1-6任意一項(xiàng)所述的試紙檢測(cè)肺炎支原體IgM，其特征在于，包括如下步驟：將樣品點(diǎn)樣在組裝好的試紙上接近肺炎支原體IgM單克隆抗體的一端，反應(yīng)5min后，在紫外分析儀中觀察結(jié)果。