[發明專利]適合除草劑篩選標記Bar基因的RNA干擾載體

有效

• 申請號: 201310484523.3
• 申請日: 2013-10-17
• 公開（公告）號: CN103642827B
• 公開（公告）日: 2017-05-17
• 發明（設計）人: 張玲;董英山;張原宇;張春寶;王玉民;于志晶
• 申請（專利權）人: 吉林省農業科學院
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;C12N15/66;C12Q1/68;A01H5/00
• 代理公司: 吉林長春新紀元專利代理有限責任公司22100
• 代理人: 王薇

1.一種適合除草劑篩選標記Bar基因的載體，其特征在于，所述載體包含干擾載體、DNA片段2以及DNA片段3，所述干擾載體包含水稻GAS1基因LOC_Os01g68860內含子、位于所述水稻GAS1基因LOC_Os01g68860內含子兩側的上游的多克隆位點和下游的多克隆位點，所述內含子為序列表序列1中第9621-10099位核苷酸，上游的多克隆位點為BamHI、SmaI、XmaI、MluI，下游的多克隆位點為HpaI、SpeI和SacI；所述適合除草劑篩選標記Bar基因的載體按照如下I或Ⅱ方法制備：

I包括以下步驟：

1）將DNA片段2插入所述的干擾載體的上游多克隆位點，得到含有下游多克隆位點的中間載體A；

2）將DNA片段3插入步驟1）得到的中間載體A的下游多克隆位點，得到適合除草劑篩選標記Bar基因的載體；

Ⅱ包括以下步驟：

A、將DNA片段3插入所述的干擾載體的下游多克隆位點，得到含有上游多克隆位點的中間載體B；

B、將DNA片段2插入步驟A得到的中間載體B的上游多克隆位點，得到適合除草劑篩選標記Bar基因的載體；

所述的DNA片段2的核苷酸序列為序列表中序列4；

所述的DNA片段3的核苷酸序列為序列表中序列5。

2.根據權利要求1所述的適合除草劑篩選標記Bar基因的載體，其特征在于所述的適合除草劑篩選標記Bar基因的載體的構建中，DNA片段2和DNA片段3通過同源重組插入干擾載體的多克隆位點處得到適合除草劑篩選標記Bar基因的載體，或DNA片段2和DNA片段3通過雙酶切與經過同樣酶切處理的干擾載體連接得到適合除草劑篩選標記Bar基因的載體。