[發明專利]一種杯珊瑚菌菌絲多糖的提取方法

有效

• 申請號: 201310480672.2
• 申請日: 2013-10-15
• 公開（公告）號: CN103554286A
• 公開（公告）日: 2014-02-05
• 發明（設計）人: 陳朋;嚴曉娟;梁寧;胡先望
• 申請（專利權）人: 甘肅省商業科技研究所
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A01G1/04
• 代理公司: 蘭州中科華西專利代理有限公司 62002
• 代理人: 李艷華

技術領域

本發明涉及真菌多糖技術領域，尤其涉及一種杯珊瑚菌菌絲多糖的提取方法。?

背景技術

隴南康縣地處西秦嶺南側隴南山中，最高海拔2483m，最低海拔560m，垂直高差較大，具有明顯的立體氣候特點。復雜的地形、氣候環境，造就了該地區亞熱帶向暖溫帶過渡氣候，溫和濕潤，雨量充沛，自然資源十分豐富，擁有高等植物172科1000余種，活立木蓄積量800多萬立方米，森林覆蓋率高達60%以上，國家和省列珍貴樹種28種，天麻、杜仲等野生藥材576種，各種菌類96種，尤其是大型真菌中的珊瑚菌類。杯珊瑚菌，別名杯冠瑚菌，屬非褶菌目、珊瑚菌科、杯珊瑚菌屬，近白色或淡黃色、淺粉紅色，柄纖細，頂端杯狀。在我國主要分布于吉林、河北、河南、湖南、福建、陜西、四川、甘肅等省。杯珊瑚菌是我國珍貴的野生食用菌資源，具有很高的營養和藥用價值。杯珊瑚菌多糖具有降血糖、降血脂、抗氧化、抗衰老、增強免疫功能等多種生理活性。目前對杯珊瑚菌多糖的提取研究領域基本空白。?

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種操作簡單、成本低、多糖得率高的杯珊瑚菌菌絲多糖的提取方法。?

為解決上述問題，本發明所述的一種杯珊瑚菌菌絲多糖的提取方法，包括以下步驟：?

⑴制備馬鈴薯葡萄糖斜面培養基：將馬鈴薯洗凈去皮切碎，按其質量的4~6倍加水煮沸25~35min后用紗布過濾，得到濾液A，該濾液A補足至1.0L依次加入5~10g葡萄糖和5~10g瓊脂，使其pH值為6.0~8.0，在90~100℃溫度下充分加熱溶解后分裝，在壓強為1.05Kg/cm²、溫度為121℃的條件下滅菌20min即得；

⑵制備種子培養基：將馬鈴薯洗凈去皮切碎，按其質量的4~6倍加水煮沸25~35min后用紗布過濾，得到濾液B，該濾液B補足至1.0L加入5~10g葡萄糖，使其pH值為6.0~8.0，在90~100℃溫度下充分加熱溶解后分裝，在壓強為1.05Kg/cm²、溫度為121℃的條件下滅菌20min即得；

⑶制備發酵培養基：將馬鈴薯洗凈去皮切碎，按其質量的4~6倍加水煮沸25~35min后用紗布過濾，得到濾液C，該濾液C補足至1.0L加入5~10g葡萄糖，使其pH值為6.0~8.0，在90~100℃溫度下充分加熱溶解后分裝，在壓強為1.05Kg/cm²、溫度為121℃的條件下滅菌20min即得；

⑷真菌的發酵培養：接一環杯珊瑚菌菌絲至所述馬鈴薯葡萄糖斜面培養基上，于28℃恒溫培養4~10天后，置于4℃冰箱中，得到活化培養后的菌絲體；

⑸接一環所述活化培養后的菌絲體至裝有10mL所述種子培養基的試管中，并置于恒溫振蕩器上，在28℃條件下以100~200?r/min的速率進行振蕩培養4~10天，制得pH值為5.0~7.0的菌種種子液；

⑹將所述菌種種子液按5~20%的接種量接種至含有所述發酵培養基的搖瓶中，并置于恒溫振蕩器上，在28℃條件下以100~200?r/min的速率進行振蕩培養4~10天，即得發酵液；所述發酵液在高速冷凍離心機中于5000r/min離心20min，得到菌絲體；所述菌絲體用蒸餾水洗滌后在真空干燥箱于60℃下烘干至恒重后磨成粉，得到菌絲體干粉末；所述發酵培養基在所述搖瓶中的裝瓶量為10~30%；

⑺在所述菌絲體干粉末中按1?g：10?mL?~30mL的料液比加入去離子水，在功率為100~300W的條件下超聲提取10~30?min后，在溫度為80~95℃的條件下浸提次數1~3次，每次1~3h，合并提取液，得到多糖浸提液；

⑻將所述多糖浸提液在高速冷凍離心機中于4000r/min離心10~20min過濾后，得到上清液A，該上清液A在溫度為60℃、真空度為0.06~0.08MPa的條件下濃縮至原上清液A體積的1/5~1/3，得到多糖濃縮液；

⑼在所述多糖濃縮液中按其體積的1/4加入Sevag試劑，充分混合攪拌20min，再用高速冷凍離心機以5000?r/min離心20?min除掉變性蛋白質，棄去水與有機相間的蛋白變性層，收集上清液B，反復多次直到所述上清液B與有機相中間有清晰的分界面為止，視為蛋白質除盡，即得多糖提取液；

⑽將50~100?mL所述多糖提取液以2~5?mL/min的流速通過苯乙烯系大孔弱堿性陰樹脂離子交換樹脂床進行脫色，得到多糖流出液；

⑾在所述多糖流出液中按其體積的2~4倍加入質量濃度為95%的乙醇，在4℃下靜置24h，得到沉淀物A；