[發(fā)明專利]一種杯珊瑚菌菌絲多糖的提取方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201310480672.2 | 申請日： | 2013-10-15 |
| 公開（公告）號： | CN103554286A | 公開（公告）日： | 2014-02-05 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 陳朋;嚴(yán)曉娟;梁寧;胡先望 | 申請（專利權(quán)）人： | 甘肅省商業(yè)科技研究所 |
| 主分類號： | C08B37/00 | 分類號： | C08B37/00;A01G1/04 |
| 代理公司： | 蘭州中科華西專利代理有限公司 62002 | 代理人： | 李艷華 |
| 地址： | 730010 甘肅省蘭州市城關(guān)區(qū)雁*** | 國省代碼： | 甘肅;62 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 珊瑚 菌絲 多糖 提取 方法 | ||
1.?一種杯珊瑚菌菌絲多糖的提取方法，包括以下步驟：
⑴制備馬鈴薯葡萄糖斜面培養(yǎng)基：將馬鈴薯洗凈去皮切碎，按其質(zhì)量的4~6倍加水煮沸25~35min后用紗布過濾，得到濾液A，該濾液A補(bǔ)足至1.0L依次加入5~10g葡萄糖和5~10g瓊脂，使其pH值為6.0~8.0，在90~100℃溫度下充分加熱溶解后分裝，在壓強(qiáng)為1.05Kg/cm2、溫度為121℃的條件下滅菌20min即得；
⑵制備種子培養(yǎng)基：將馬鈴薯洗凈去皮切碎，按其質(zhì)量的4~6倍加水煮沸25~35min后用紗布過濾，得到濾液B，該濾液B補(bǔ)足至1.0L加入5~10g葡萄糖，使其pH值為6.0~8.0，在90~100℃溫度下充分加熱溶解后分裝，在壓強(qiáng)為1.05Kg/cm2、溫度為121℃的條件下滅菌20min即得；
⑶制備發(fā)酵培養(yǎng)基：將馬鈴薯洗凈去皮切碎，按其質(zhì)量的4~6倍加水煮沸25~35min后用紗布過濾，得到濾液C，該濾液C補(bǔ)足至1.0L加入5~10g葡萄糖，使其pH值為6.0~8.0，在90~100℃溫度下充分加熱溶解后分裝，在壓強(qiáng)為1.05Kg/cm2、溫度為121℃的條件下滅菌20min即得；
⑷真菌的發(fā)酵培養(yǎng)：接一環(huán)杯珊瑚菌菌絲至所述馬鈴薯葡萄糖斜面培養(yǎng)基上，于28℃恒溫培養(yǎng)4~10天后，置于4℃冰箱中，得到活化培養(yǎng)后的菌絲體；
⑸接一環(huán)所述活化培養(yǎng)后的菌絲體至裝有10mL所述種子培養(yǎng)基的試管中，并置于恒溫振蕩器上，在28℃條件下以100~200?r/min的速率進(jìn)行振蕩培養(yǎng)4~10天，制得pH值為5.0~7.0的菌種種子液；
⑹將所述菌種種子液按5~20%的接種量接種至含有所述發(fā)酵培養(yǎng)基的搖瓶中，并置于恒溫振蕩器上，在28℃條件下以100~200?r/min的速率進(jìn)行振蕩培養(yǎng)4~10天，即得發(fā)酵液；所述發(fā)酵液在高速冷凍離心機(jī)中于5000r/min離心20min，得到菌絲體；所述菌絲體用蒸餾水洗滌后在真空干燥箱于60℃下烘干至恒重后磨成粉，得到菌絲體干粉末；所述發(fā)酵培養(yǎng)基在所述搖瓶中的裝瓶量為10~30%；
⑺在所述菌絲體干粉末中按1?g：10?mL?~30mL的料液比加入去離子水，在功率為100~300W的條件下超聲提取10~30?min后，在溫度為80~95℃的條件下浸提次數(shù)1~3次，每次1~3h，合并提取液，得到多糖浸提液；
⑻將所述多糖浸提液在高速冷凍離心機(jī)中于4000r/min離心10~20min過濾后，得到上清液A，該上清液A在溫度為60℃、真空度為0.06~0.08MPa的條件下濃縮至原上清液A體積的1/5~1/3，得到多糖濃縮液；
⑼在所述多糖濃縮液中按其體積的1/4加入Sevag試劑，充分混合攪拌20min，再用高速冷凍離心機(jī)以5000?r/min離心20?min除掉變性蛋白質(zhì)，棄去水與有機(jī)相間的蛋白變性層，收集上清液B，反復(fù)多次直到所述上清液B與有機(jī)相中間有清晰的分界面為止，視為蛋白質(zhì)除盡，即得多糖提取液；
⑽將50~100?mL所述多糖提取液以2~5?mL/min的流速通過苯乙烯系大孔弱堿性陰樹脂離子交換樹脂床進(jìn)行脫色，得到多糖流出液；
⑾在所述多糖流出液中按其體積的2~4倍加入質(zhì)量濃度為95%的乙醇，在4℃下靜置24h，得到沉淀物A；
⑿將所述沉淀物A經(jīng)高速冷凍離心機(jī)以4000?r／min離心20?min后，得到沉淀物B，該沉淀物B置于真空干燥箱內(nèi)，經(jīng)50℃真空干燥至恒重，即得多糖干品。
2.如權(quán)利要求1所述的一種杯珊瑚菌菌絲多糖的提取方法，其特征在于：所述步驟⑷中杯珊瑚菌菌絲是指采集于隴南康縣的杯珊瑚菌?Artomyces?pyxidatus??KX320SH按常規(guī)方法經(jīng)組織分離獲得的杯珊瑚菌菌絲；所述杯珊瑚菌Artomyces?pyxidatus??KX320SH在中國典型培養(yǎng)物保藏中心的保藏編號為CCTCC??NO：M?2012112，其分子生物學(xué)鑒定后的核酸序列提交至GenBank的登錄號為JQ086388。
3.如權(quán)利要求1所述的一種杯珊瑚菌菌絲多糖的提取方法，其特征在于：所述步驟⑼中Sevag試劑是指氯仿與正丁醇按4mL：1mL混合而成的混合液。
該專利技術(shù)資料僅供研究查看技術(shù)是否侵權(quán)等信息，商用須獲得專利權(quán)人授權(quán)。該專利全部權(quán)利屬于甘肅省商業(yè)科技研究所，未經(jīng)甘肅省商業(yè)科技研究所許可，擅自商用是侵權(quán)行為。如果您想購買此專利、獲得商業(yè)授權(quán)和技術(shù)合作，請聯(lián)系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201310480672.2/1.html，轉(zhuǎn)載請聲明來源鉆瓜專利網(wǎng)。
