[發明專利]分離脂肪組織活細胞方法、醫藥組合物及其用途、細胞庫

有效

• 申請號: 201310478269.6
• 申請日: 2013-10-14
• 公開（公告）號: CN104560862B
• 公開（公告）日: 2019-09-13
• 發明（設計）人: 孫立易;李典錕;馮清榮;張耀仁
• 申請（專利權）人: 佛教慈濟醫療財團法人
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;A61K48/00;C40B40/02;A61P25/00;A61P19/00
• 代理公司: 北京戈程知識產權代理有限公司 11314
• 代理人: 程偉

本發明公開了一種分離脂肪組織活細胞方法、醫藥組合物及其用途、細胞庫，以解決現有以手持刀具切碎脂肪組織作為分離脂肪組織中活細胞的前置步驟，僅能分離出少量活細胞且具較低的細胞存活率的缺點；本發明的方法包括：提供一脂肪組織；利用一切割裝置將前述脂肪組織均質切碎；于前述已切碎的脂肪組織中加入一試劑進行水解；進一步離心分離；移除上清液，以獲取一細胞沉淀物；借此，可縮短切碎脂肪組織的時間，且避免刀具重復使用造成污染，并提高自每單位重量的脂肪組織獲得活細胞數，且不降低細胞存活率，作為分離脂肪組織活細胞的用途。

技術領域

本發明涉及一種分離脂肪組織活細胞方法、醫藥組合物及其用途、細胞庫，尤其是指一種利用一切割裝置將脂肪組織快速均質切碎，以利進一步自脂肪組織中分離出活細胞，以提高自每單位重量的脂肪組織獲得活細胞數，且不降低細胞存活率。

背景技術

按，間葉干細胞的來源可自人體許多不同組織分離出來，例如由手術直接切除或經由抽脂手術取得的脂肪組織即為一干細胞豐富的來源，可分離出脂肪干細胞(Adiposetissue-derived stem cells, ADSCs)，其具有的優點有：取得方式侵入性低，對人體傷害小、且一次取得的量較多、可于體外增生培養等；加上脂肪干細胞亦擁有可分化成硬骨、軟骨、肌肉以及脂肪細胞的潛力(Zuk et al., 2002)，因此，脂肪干細胞被認為是最具研究發展潛力的干細胞之一。

現今對于手術直接切除而得的塊狀脂肪組織切碎處理方式尚未有一套合適的自動化系統來搭配使用，而一般切碎處理方式有如中國臺灣專利201331366號一種「體外無血清成體干細胞放大培養技術」，其方法中揭示經手術切脂取得脂肪組織塊，并進一步利用手術刀具切碎該脂肪組織后與膠原蛋白酶酵素作用，再經分離可得基質血管層細胞(Stromalvascular fraction，SVF)，為基質細胞、血液細胞、血管內皮細胞與脂肪干細胞等共同組合而成。惟，其利用手術刀具切碎脂肪組織的步驟，需要耗費較多時間才得以將脂肪組織盡可能的切碎，以獲取較多的基質血管層細胞；而操作切碎步驟的時間越長，對前述基質血管層細胞的存活率影響就越大，以至所獲取的脂肪間質干細胞其存活率相對較低。此外，操作人員于操作不同來源檢體時較容易因重復使用手術刀具而產生檢體交叉污染的風險。

另如中國臺灣專利201235471號「包含眼窩脂肪衍生的干細胞（ＯＦＳＣ）的細胞群及彼等的分離與應用」，其方法中揭示由眼眶內腔直接移除的眼窩組織中收集而得，或由眼瞼內翻、眼瞼外翻、眼瞼下垂或眼袋的瞼造型手術所收集而得的眼窩脂肪，可簡易的使用剪刀或鑷子支解該眼窩脂肪組織再與膠原蛋白酶酵素作用，再進行過濾、離心分離以獲得細胞沉淀物，并將該細胞沉淀物進行細胞培養以獲得具有群落形成能力的細胞。惟，該案所揭示的方法同樣存在有使用剪刀或鑷子支解該眼窩脂肪組織，需要耗費較多時間才得以將脂肪組織盡可能的切碎，以獲取較多的細胞沉淀物；且相對地，其操作切碎步驟的時間越長，對前述細胞沉淀物中細胞的存活率的影響就越大。

綜合上述，為了解決上述現有利用手術刀具進行脂肪組織切碎作業所帶來的缺失，亟需要一可快速切碎脂肪組織以分離活細胞的方法，在不降低細胞存活率前提下，以進一步提高自每單位重量的脂肪組織取得活細胞數目。

發明內容

本發明的目的在于提供一種分離脂肪組織活細胞方法、醫藥組合物及其用途、細胞庫，以期達到提高自每單位重量的脂肪組織取得活細胞數且不降低細胞存活率的目的。

為了達成上述目的，本發明的解決方案是：

一種分離脂肪組織活細胞方法，其包括有下列步驟：

步驟a提供一脂肪組織；

步驟b將該脂肪組織置于一切割裝置的封閉容器中；

步驟c使該切割裝置對該封閉容器施予一作用力，令該封閉容器中的一預設切削刀具對該脂肪組織執行快速均質切碎，獲得一均質化脂肪組織；