[發明專利]分離脂肪組織活細胞方法、醫藥組合物及其用途、細胞庫

有效

• 申請號: 201310478269.6
• 申請日: 2013-10-14
• 公開（公告）號: CN104560862B
• 公開（公告）日: 2019-09-13
• 發明（設計）人: 孫立易;李典錕;馮清榮;張耀仁
• 申請（專利權）人: 佛教慈濟醫療財團法人
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;A61K48/00;C40B40/02;A61P25/00;A61P19/00
• 代理公司: 北京戈程知識產權代理有限公司 11314
• 代理人: 程偉

1.一種分離脂肪組織活細胞中的基質血管層細胞的方法，其特征在于，包括有下列步驟：

步驟a提供一人類的脂肪組織；

步驟b將該脂肪組織置于一切割裝置的封閉容器中；

步驟c使該切割裝置對該封閉容器施予一作用力，令該封閉容器中的一預設切削刀具對該脂肪組織執行快速均質切碎，獲得一均質化脂肪組織；

步驟d于前述已切碎的該均質化脂肪組織中加入一試劑，進行水解反應；

步驟e將前述經水解反應處理過的該均質化脂肪組織進行過濾、離心分離；及

步驟f將離心分離后的上清液移除，以獲取一細胞沉淀物，其中前述步驟b中所述的切割裝置是一拋棄式的均質機，前述拋棄式的均質機包含有一拋棄式封閉容器及一動力單元，且該拋棄式封閉容器內具有一切削刀具；前述步驟c均質切碎條件為于15毫升體積的拋棄式封閉容器內置入3公克至6公克脂肪組織，且所述均質機的轉速為1200每分鐘轉數至1500每分鐘轉數，而作用時間為3分鐘至10分鐘，以進行快速均質切碎。

2.如權利要求1所述的分離脂肪組織活細胞中的基質血管層細胞的方法，其特征在于：于步驟a前可包含一以磷酸緩沖溶液清洗前述脂肪組織的步驟。

3.如權利要求1所述的分離脂肪組織活細胞中的基質血管層細胞的方法，其特征在于：步驟c均質切碎較佳條件為于15毫升體積的拋棄式封閉容器內置入3公克脂肪組織，進行快速均質切碎。

4.如權利要求1所述的分離脂肪組織活細胞中的基質血管層細胞的方法，其特征在于：前述步驟d中所述的試劑是選自一胰蛋白酶(Trypsin)、一中性蛋白酶(Dispase)、一膠酶(Gelatase)、一玻尿酸酶(Hyaluronidase)、一第一型膠原蛋白酶(Collagenase type I)或一第四型膠原蛋白酶(Collagenase type IV)所構成群組之一或其組合。

5.如權利要求1所述的分離脂肪組織活細胞中的基質血管層細胞的方法，其特征在于：前述步驟d中所述的水解反應是全程置于一恒溫雜交反應烘箱中進行，且條件為攝氏4度至45度、轉速為5每分鐘轉數至50每分鐘轉數，以及時間0.5小時至24小時。

6.如權利要求5所述的分離脂肪組織活細胞中的基質血管層細胞的方法，其特征在于：條件為攝氏37度、轉速為15每分鐘轉數以及時間8小時。

7.如權利要求1所述的分離脂肪組織活細胞中的基質血管層細胞的方法，其特征在于：前述步驟e中所述離心的條件為400×g、時間10分鐘。

8.如權利要求1所述的分離脂肪組織活細胞中的基質血管層細胞的方法，其特征在于：前述步驟e更包含將過濾掉脂肪組織碎渣后所得一過濾液移入一離心管的步驟，以進行離心分離。

9.如權利要求1所述的分離脂肪組織活細胞中的基質血管層細胞的方法，其特征在于：前述步驟f中所述的細胞沉淀物是一基質血管層細胞。

10.如權利要求1所述的分離脂肪組織活細胞中的基質血管層細胞的方法，其特征在于：前述步驟f之后更包括一步驟g將磷酸緩沖溶液加入前述細胞沉淀物中，清洗前述細胞沉淀物，再次離心以去除含有血水及前述試劑的上清液，獲得一清洗后的細胞沉淀物。

11.如權利要求10所述的分離脂肪組織活細胞中的基質血管層細胞的方法，其特征在于：前述步驟g之后更包括一步驟h將前述清洗后的細胞沉淀物置入一培養基中培養，以獲取一擴增的細胞。

12.如權利要求11所述的分離脂肪組織活細胞中的基質血管層細胞的方法，其特征在于：所述培養基包含：一基礎培養基、一血清添加物、一第二型纖維母細胞生長因子。