[發明專利]一種發酵法制備棘白菌素B的方法及菌株

有效

• 申請號: 201310477670.8
• 申請日: 2013-10-12
• 公開（公告）號: CN103555591A
• 公開（公告）日: 2014-02-05
• 發明（設計）人: 鄭裕國;鄒樹平;牛坤;鐘偉;毛健;沈寅初
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P21/04;C12R1/66
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;冷紅梅

1.一株構巢曲霉菌突變株——構巢曲霉（Aspergillus?nidulans）ZJB09223，保藏于中國典型培養物保藏中心，地址：中國，武漢，武漢大學，郵編430072，保藏編號為CCTCC?NO：M2012300，保藏日期為2012年07月25日。

2.利用權利要求1所述的構巢曲霉ZJB09223發酵法制備棘白菌素B的方法，所述方法包括：

（1）種子培養：將構巢曲霉ZJB09223接種至種子培養基，25～30℃培養24～48h，獲得種子液；所述種子培養基組成如下：葡萄糖0.5～1.5%，甘油0.5～5%，棉籽粉1～10%，溶劑為蒸餾水，pH值自然；

（2）發酵培養：步驟（1）種子液以1～10%體積比接種至發酵培養基，20～30℃、220～280rpm下培養7～12天，得到發酵液，發酵液經分離純化得到所述棘白菌素B；所述發酵培養基組成如下：甘油0.5～5%，蛋白胨0.5～5%，L-脯氨酸0.1～0.5%，甘露醇1～10%，黃豆餅粉1～10%，鳥氨酸0.1～0.5%，花生油0.5～5%，K₂HPO₄3H₂O0.2～2%，MgSO₄7H₂O0.01%～0.1%，MnPO₄H₂O0.01%～0.1%，FeSO₄7H₂O0.005%，CaCl₂0.01%～0.1%，CuSO₄.5H₂O0.01%～0.1%，溶劑為蒸餾水，pH值自然。

3.如權利要求2所述的方法，其特征在于所述分離純化方法如下：發酵液離心，分別收集沉淀和上清液；上清液經異丁醇充分萃取后收集異丁醇萃取相；沉淀用異丁醇浸提，離心收集異丁醇液相；合并異丁醇相，濃縮，加入5～10倍異丁醇相體積的乙酸乙酯，0℃下過夜結晶，過濾，得到棘白菌素B晶體。