[發明專利]一種檢測蚜蟲非特異性酯酶活性的方法及檢測試劑盒

無效

• 申請號: 201310476436.3
• 申請日: 2013-10-12
• 公開（公告）號: CN103497990A
• 公開（公告）日: 2014-01-08
• 發明（設計）人: 高希武;劉曉嵐;湯秋玲;李永丹;梁沛
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12Q1/44
• 分類號: C12Q1/44
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

1.一種檢測蚜蟲非特異性酯酶活性的方法，其特征在于，將底物α-乙酸萘酯和底物β-乙酸萘酯按1:1等體積混合作為混合底物，制備吸附混合底物的濾紙；采集蚜蟲田間種群，勻漿單頭蚜蟲后，將勻漿液滴到濾紙上顯色，與標準色板對比，濾紙顯色越深，個體酶活性越高。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，其具體包括以下步驟：

（1）配制底物：用丙酮配制質量濃度為1%的α-乙酸萘酯和質量濃度為1%的β-乙酸萘酯，4℃冰箱保存；

（2）將步驟（1）配制的底物按1:1等體積混合，將濾紙浸入其中，2min后，室溫陰干；

（3）用pH7.0的磷酸緩沖液配制0.15%的固藍B鹽作為勻漿液，勻漿單頭蚜蟲，取1/20體積的勻漿液滴到步驟（2）中制備的濾紙上，室溫避光放置15min；

（4）待顯色完全后，統計步驟（3）中的個體顯色顏色，與標準色板對比，濾紙顯色越深，個體酶活性越高。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟（3）中pH7.0的磷酸緩沖液，由磷酸二氫鉀和十二水合磷酸氫二鈉配制，濃度為0.04M。

4.一種檢測蚜蟲非特異性酯酶活性的檢測試劑盒，其特征在于，該試劑盒包括：

（1）吸附有混合底物的濾紙：

將丙酮配制的質量濃度為1%的α-乙酸萘酯和質量濃度為1%的β-乙酸萘酯等體積混合，吸附于定性濾紙上，陰干，錫箔紙包裹于4℃保存；

（2）顯色劑緩沖液：以0.04M、pH7.0的磷酸緩沖液配制0.15%的顯色劑固藍B。

5.利用權利要求1-3任一項所述方法，檢測蚜蟲種群抗性個體頻率的方法，其特征在于，采集蚜蟲田間種群，勻漿單頭蚜蟲后，將勻漿液滴到濾紙上顯色，與標準色板對比，統計個體顯色顏色，每一種群重復檢測100頭以上，計算種群抗性個體頻率；所述抗性為有機磷抗性。