[發明專利]一種利用鰹魚加工副產物制備抗氧化肽的方法

有效

• 申請號: 201310476243.8
• 申請日: 2013-10-12
• 公開（公告）號: CN103540638A
• 公開（公告）日: 2014-01-29
• 發明（設計）人: 付才力;蔡國煌
• 申請（專利權）人: 福建莆田市海一百食品有限公司
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06
• 代理公司: 廈門市首創君合專利事務所有限公司 35204
• 代理人: 楊依展

技術領域

本發明屬于海洋生物工程酶法生產工藝技術，是一種酶法水解鰹魚制備抗氧化肽粉的工藝方法。

背景技術

目前，水產加工業已經成為我國漁業經濟重要的一環。尤其是水產罐頭加工出口，為我國提供了大量的就業機會、大幅增加了個人收入和外匯來源。在水產罐頭尤其是魚罐頭生產中，會產生大量蒸煮液和頭尾段等副產物，每年我國魚類加工中總計有近百萬噸蒸煮液亟待開發，而低值處理作飼料或拋棄的頭尾段等副產物則達幾百萬噸。魚類加工蒸煮液及下腳料副產物中的蛋白是生物活性肽的優質來源。研究表明，金槍魚蒸煮液中蛋白含量達4%，每年臺灣省光金槍魚罐頭加工所產生的蒸煮液中就至少含有400噸優質蛋白。魚類加工下腳料中含有的蛋白含量更是可高達20%以上。

鰹魚，屬鱸形總目、金槍魚亞目、金槍魚科、舵鰹亞科、鰹屬，又名正鰹、炸彈魚、堅魚、松魚、飛虎魚。鰹魚是大洋性重要經濟魚。鰹魚可供鮮食或制成咸干品，世界主要漁業國利用鰹魚加工成罐頭制品，在歐美市場十分暢銷。鰹魚分布范圍較廣，在印度洋、太平洋和大西洋水溫高于15攝氏度以上的水域，都有鰹魚的蹤跡，并且儲量豐富、開發利用前景樂觀。2005年來,僅中西太平洋的鰹魚的平均產量就達l25萬噸/年。劉承初等研究表明自溶酶解法是回收魚類加工廢棄物中蛋白質成分的一種有效的方法。王玉明等的研究表明鰹魚肝臟酶解物對高果糖大鼠具有明顯的降壓活性。然而，酶解鰹魚罐頭加工蒸煮液及頭尾段副產物制備抗氧化肽方面的研究尚屬空白。

目前海洋生物活性肽的提取方法主要有3種：溶劑萃取、微生物發酵和酶水解。由于酶水解法沒有有機溶劑及有毒的化學品的殘留已成為食品和制藥工業的首選方法。在酶法制備的過程中若要獲得理想的提取率，蛋白酶的選擇、酶解條件的選擇、分離技術這三方面至關重要。

目前在工業生產上用酶法制備生物活性肽應用比較廣泛的蛋白酶主要有胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、組織蛋白酶、胃蛋白酶和枯草桿菌蛋白酶等內肽酶。由于不同的蛋白酶酶切位點不同。同一蛋白片段在使用不同蛋白酶酶解后，所得的產物生物性質將差異很大。如胰蛋白酶只催化水解堿性氨基酸所形成的肽鍵，底物特異性較窄，所以酶切位點相對較少，酶切片段較大；木瓜蛋白酶能作用于蛋白質中L-賴氨酸、甘氨酸、卜精氨酸和b瓜氨酸等參與形成的肽鍵.底物特異性較寬，所以其酶切位點較為廣泛，所得酶切片段分子量相對較小。因此，在開發特定功能的生物活性肽時要根據要求選擇合適的一種或幾種蛋白酶。

酶解時間、蛋白酶最適pH、蛋白酶最適溫度和加酶量，以及料液比是影響最終多肽得率的重要因素。首先，酶解時間對多肽得率至關重要，在酶解過程中多肽得率呈現了4個階段：迅速上升階段，緩慢增長階段，穩定階段，輕微下降階段。其中穩定階段多肽含量最高。國內外許多酶法制備海洋生物活性肽的研究已證實這種蛋白酶解曲線。因此，在酶解過程中，必須掌握好酶解時間。其次，蛋白酶的最適作用溫度、pH對多肽得率影響顯著。在不同的反應體系中，要根據底物濃度、種類及緩沖液等因素來設定蛋白酶的最適作用溫度、pH等反應條件。

近年來大量的研究表明，從各種海洋生物蛋白水解液中分離得到的多肽，具有潛在的抗氧化能力。目前國內外報道已從烏賊、牡蠣、藍貽貝、長尾鱈、竹莢魚及鱈魚等海洋動物中分離得到抗氧化活性肽。這些海洋生物抗氧化活性肽能有效地清除機體內的自由基和活性氧或者通過阻斷脂質過氧化過程中的自由基鏈式反應來預防因氧化而造成的機體損傷。

發明內容

本發明的目的是提出一種利用鰹魚加工副產物制備抗氧化肽的酶解工藝方法，優化酶解工藝參數，以提高生物活性肽的回收率，獲得分子量較小且具有良好抗氧化活性的肽粉。

本發明是按以下技術方案實現的，

一種利用鰹魚加工副產物制備抗氧化肽的方法，包括如下步驟：

（1）鰹魚罐頭加工副產物→組合粉碎；下腳料與蒸煮液的重量比比例范圍為1-3:1，粉碎至40目-60目

（2）三相分離，去除油相；

（3）酶解：并使混合液溫度升至50℃攪拌預熱，并于攪拌狀態下保溫20min;然后加入風味蛋白酶（Flavourzyme），啟動酶解反應，加酶量范圍為1000-5000U/g，酶解溫度為45-55℃，連續攪拌，酶解液起始pH值6-7，酶解時間為3-5h，得酶解產物；

（4）滅酶：

（5）超濾：將酶解液先用0.45um的中空纖維膜進行微濾，取濾液；微濾后的酶解液經10000Da的超濾膜超濾后，其透過液再用1000Da的膜超濾，滯留液。（6）脫腥脫色。