[發(fā)明專利]一種產(chǎn)高光學(xué)純度L-乳酸的干酪乳桿菌及其發(fā)酵方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310474231.1
• 申請(qǐng)日: 2013-10-12
• 公開（公告）號(hào): CN103642711A
• 公開（公告）日: 2014-03-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 咸漠;鄒慧斌;劉煒;程濤
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院青島生物能源與過程研究所
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12P7/56;C12R1/245
• 代理公司: 北京愛普納杰專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11419
• 代理人: 何自剛;王玉松

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種產(chǎn)高光學(xué)純度L-乳酸的干酪乳桿菌及其發(fā)酵方法。?

背景技術(shù)

干酪乳桿菌（Lactobacillus?casei）屬于乳桿菌屬，是革蘭氏陽性菌，不產(chǎn)芽孢，無鞭毛，不運(yùn)動(dòng)，兼性異型發(fā)酵乳糖，不液化明膠，最適生長(zhǎng)溫度為37℃，G+C含量為45.6%～47.2%，菌體長(zhǎng)短不一，兩端成方形，常成鏈；菌落粗糙，灰白色，有時(shí)呈微黃色，能發(fā)酵多種糖。?

由于發(fā)酵法生產(chǎn)L-乳酸，雖然產(chǎn)量大，但是L-乳酸的光學(xué)純度低，所以通過紫外誘變和DES誘變來提高L-乳酸的光學(xué)純度是一個(gè)經(jīng)濟(jì)可行的方法。如何培育出一株高光學(xué)純L-乳酸的突變菌株，能夠解決用發(fā)酵法L-乳酸光學(xué)純度低的缺點(diǎn)，以此來彌補(bǔ)上述缺陷。?

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明提供一種干酪乳桿菌，保藏編號(hào)為CGMCC?No.8029，分類命名為干酪乳桿菌Lactobacillus?casei,該菌株于2013年8月15日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)。?

上述干酪乳桿菌生產(chǎn)L-乳酸的光學(xué)純度高達(dá)98.83。?

本發(fā)明還提供了一種所述干酪乳桿菌的應(yīng)用，是用CGMCC?No.8029發(fā)酵生產(chǎn)L-乳酸。?

所述發(fā)酵生產(chǎn)L-乳酸的優(yōu)選培養(yǎng)基組成如下：葡萄糖、酵母粉、乙酸鈉、磷酸鹽、甜菜堿和微量元素液。?

更進(jìn)一步，優(yōu)選培養(yǎng)基組成為(g/100mL)：葡萄糖16，酵母粉1，乙酸鈉0.2，KH₂PO₄0.1，甜菜堿0.2，MgSo₄·7H₂O0.02，MnSO₄·H₂O0.005，CaCO₃10。?

上述干酪乳桿菌的接種量?jī)?yōu)選為10%。?

上述發(fā)酵溫度優(yōu)選為37℃，搖床培養(yǎng)時(shí)間優(yōu)選為72h。?

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：?

1、通過誘變方法對(duì)干酪乳桿菌進(jìn)行改造，方法簡(jiǎn)單、誘變成本低，L-乳酸光學(xué)純度高達(dá)98.83%。?

2、誘變后所獲得菌株使得運(yùn)用發(fā)酵法生產(chǎn)高光學(xué)純度的L-乳酸成為可能，有利于降低發(fā)酵成本。?

3、發(fā)酵穩(wěn)定性較好，經(jīng)過多次發(fā)酵生產(chǎn)，其L-乳酸的產(chǎn)酸能力和純度比較穩(wěn)定，不發(fā)生較大程度的下降。?

附圖說明

圖1CGMCC?No.8029發(fā)酵生產(chǎn)L-乳酸光學(xué)純度色譜圖。?

具體實(shí)施方式

本發(fā)明采用MRS培養(yǎng)基組成（g/L）：蛋白胨10.0，牛肉膏8.0，酵母粉4.0，葡萄糖20.0，磷酸氫二鉀2.0，檸檬酸氫二胺2.0，乙酸鈉5.0，硫酸鎂0.2，硫酸錳0.04，吐溫-801.0，pH值5.7±0.2，于118℃滅菌25min。YE培養(yǎng)基：15g酵母粉，20g葡萄糖，1000mL蒸餾水，酵母粉和葡萄糖分別滅菌，冷卻后混合，固體YE培養(yǎng)基中加入1.5%瓊脂，2%CaCO₃(CaCO₃與培養(yǎng)基分開滅菌)。?

L-乳酸光學(xué)純度測(cè)定條件：采用Sumichiral?OA-50004.6mm×150mm手性分離柱，流動(dòng)相為2mmol/L?CuSO₄5%異丙醇，流速為1mL/min,柱溫35℃，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)236nm。?

L-乳酸含量的測(cè)定：先將發(fā)酵結(jié)束后的發(fā)酵液混勻，移取發(fā)酵液100uL稀釋到500倍，10000/min離心1min，用生物傳感分析儀測(cè)定，將三個(gè)平行的搖瓶實(shí)驗(yàn)測(cè)定后取其平均值。?

菌體濃度的測(cè)定：先將發(fā)酵過后的發(fā)酵液室溫靜置30min，移取上清液100uL稀釋50倍，利用分光光度計(jì)在波長(zhǎng)600nm處測(cè)定菌體OD值，將三個(gè)平行的搖瓶實(shí)驗(yàn)測(cè)樣后取其平均值作為OD值的測(cè)定結(jié)果，發(fā)酵液中總的OD值為OD₆₀₀×稀釋倍數(shù)。?

實(shí)施例1：野生型干酪乳桿菌的生長(zhǎng)曲線的繪制?