[發(fā)明專利]一種多重PCR法檢測(cè)水稻檢疫性病原菌的引物組及試劑盒和方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310473978.5
• 申請(qǐng)日: 2013-10-11
• 公開（公告）號(hào): CN103498000A
• 公開（公告）日: 2014-01-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王雪艷;陸雯;潘潞琪;姚含笑
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)計(jì)量學(xué)院
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/64;C12R1/01
• 代理公司: 杭州天勤知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 33224
• 代理人: 沈自軍

1.一種多重PCR法檢測(cè)水稻檢疫性病原菌的引物組，其特征在于，包括三對(duì)引物：

第一對(duì)引物的堿基序列為：

上游引物：5′-CCTCTATGAGTCGGGAGCTG-3′；

下游引物：5′-ACACCGTGATGCAATGAAGA-3′；

第二對(duì)引物的堿基序列為：

上游引物：5′-CAAGACAGACATTGCTGGCA-3′；

下游引物：5′-GGTCTGGAATTTGTACTCCG-3′；

第三對(duì)引物的堿基序列為：

上游引物：5′-TCATCCTCTGACTGGCTCAA-3′；

下游引物：5′-CGCTTCCGCTATCCACTTTA-3′。

2.一種多重PCR法檢測(cè)水稻檢疫性病原菌的方法，包括：

（1）提取待檢樣品的DNA；

（2）以提取的DNA為模板，利用權(quán)利要求1所述的引物組進(jìn)行PCR擴(kuò)增；

（3）將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行凝膠電泳分離、染色，根據(jù)擴(kuò)增條帶判定待測(cè)樣品中水稻檢疫性病原菌的種類；

所述水稻檢疫性病原菌為水稻白葉枯病原菌（Xanthomonas.oryzae?pv.oryzae）、水稻細(xì)菌性條斑病原菌（X.oryzae?pv.oryzicola）和水稻細(xì)菌性谷枯病原菌（Burkolderia?glumae）。

3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，PCR擴(kuò)增體系中水稻白葉枯病原菌DNA的濃度不低于0.01ng/μL。

4.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，PCR擴(kuò)增體系中水稻細(xì)菌性條斑病原菌DNA的濃度不低于0.05ng/μL。

5.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，PCR擴(kuò)增體系中水稻細(xì)菌性谷枯病原菌DNA的濃度不低于0.1ng/μL。

6.如權(quán)利要求2～5任一所述的方法，其特征在于，PCR擴(kuò)增體系為50μL，其中，2×Taq?PCR?Master?Mix緩沖液25μL，10μM的引物各1μL，DNA模板的終濃度不低于檢出限，滅菌去離子水補(bǔ)至50μL；所述2×TaqPCR?Master?Mix緩沖液中含有1.5mM?Mg²⁺、200μM?dNTP、1U?Taq酶。

7.一種多重PCR法檢測(cè)水稻檢疫性病原菌的試劑盒，包括PCR緩沖液，MgCl₂，dNTP，Taq酶，引物，陽(yáng)性對(duì)照DNA和滅菌去離子水，其特征在于，所述引物為權(quán)利要求1所述的引物組。

8.如權(quán)利要求6所述的試劑盒，其特征在于，還包括核酸提取液和膠回收提取液。