[發明專利]一種基于酪胺信號放大技術和適配體識別的金黃色葡萄球菌可視化檢測方法

無效

• 申請號: 201310473852.8
• 申請日: 2013-10-11
• 公開（公告）號: CN103513033A
• 公開（公告）日: 2014-01-15
• 發明（設計）人: 王周平;袁京磊;何良興;茹巧美
• 申請（專利權）人: 江南大學;杭州市余杭區農產品監測中心
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N21/31
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種基于酪胺信號放大技術和適配體識別的金黃色葡萄球菌可視化檢測方法，其特征在于：通過生物素修飾的金黃色葡萄球菌適配體將樣品中的金黃色葡萄球菌捕獲并將其固定到鏈霉親和素包被的酶標板底部，另一條生物素標記的金黃色葡萄球菌的適配體將鏈霉親和素標記的HRP(Streptavidin-HRP)引入檢測體系中，然后經過酪胺信號放大技術使信號實現幾何級的放大，最后加入TMB顯色試劑和終止液，利用酶標儀檢測吸光度值，基于此建立檢測的標準曲線，達到檢測金黃色葡萄球菌的目的。

2.如權利要求1所述的一種基于酪胺信號放大技術和適配體識別的金黃色葡萄球菌可視化檢測方法，其特征在于生物素-酪胺的制備：準確稱取10mg?Bio-NHS,溶于1mL?DMF中制成溶液A；稱取2.8mg的酪胺鹽酸，溶于0.28mLDMF中，然后加入2.8μL的三乙胺，制成溶液B；將溶液A與溶液B充分震蕩混勻，然后在室溫下避光反應2h，加入8.72mL無水乙醇，從而制得10mL生物素-酪胺溶液，并于4℃環境避光保存。

3.如權利要求1所述的一種基于酪胺信號放大技術和適配體識別的金黃色葡萄球菌可視化檢測方法，其特征在于酪胺信號放大技術：將生物素標記的金黃色葡萄球菌的適配體與鏈霉親和素標記的HRP(Streptavidin-HRP)按4：1的比例混勻，37℃孵育30min，每孔加入10μL的適配體和Streptavidin-HRP的復合物，取10μL的生物素-酪胺溶液，加到酶標板中，然后再加入5μL0.5％(v／v)的過氧化氫(H₂O₂)，37℃孵育30min，在酶標板的每個微孔中加入10μL的Streptavidin-HRP，37℃孵育30min。