[發明專利]豬瘟病毒抗體競爭AlphaLISA檢測試劑盒及檢測方法

無效

• 申請號: 201310472881.2
• 申請日: 2013-10-11
• 公開（公告）號: CN103499693A
• 公開（公告）日: 2014-01-08
• 發明（設計）人: 聶福平;楊俊;王昱;李賢良;李應國;肖進文
• 申請（專利權）人: 重慶出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 重慶市恒信知識產權代理有限公司 50102
• 代理人: 劉小紅

1.?豬瘟病毒抗體競爭AlphaLISA檢測試劑盒，其特征在于：包括供體微珠、受體微珠、豬瘟病毒E2蛋白單克隆抗體和帶His標簽的豬瘟病毒E2蛋白抗原；

其中，所述供體微珠為螯合鎳的供體微珠，PE,AS101D；所述受體微珠為抗鼠IgG受體微珠，PE,AL105C；所述帶His標簽的豬瘟病毒E2蛋白抗原的氨基酸序列如SEQ?ID?No.1所示，或該序列經替換、缺失或添加一個或幾個氨基酸形成的具有與豬瘟病毒E2蛋白抗原同等功能的氨基酸序列。

2.根據權利要求1所述豬瘟病毒抗體競爭AlphaLISA檢測試劑盒，其特征在于：所述供體微珠80μg/mL、受體微珠80μg/mL、豬瘟病毒E2蛋白單克隆抗體100nM/L及帶His標簽的豬瘟病毒E2蛋白抗原180nM/L；

使用時，以總體系20μL計，每孔添加量為：80μg/mL供體微珠5μL、80μg/mL受體微珠4μL、180nM/L帶His標簽的豬瘟病毒E2蛋白抗原5μL、100nM/L豬瘟病毒抗E2蛋白單克隆抗體?5μL及待測樣品1μL。

3.根據權利要求1或2所述豬瘟病毒抗體競爭AlphaLISA檢測試劑盒，其特征在于：編碼所述帶His標簽的豬瘟病毒E2蛋白抗原的基因為CSFV?E2基因，其核苷酸序列為SEQ?ID?NO.2。

4.根據權利要求3所述豬瘟病毒抗體競爭AlphaLISA檢測試劑盒，其特征在于：所述CSFV?E2基因是通過RT-PCR擴增反應得到的；RT-PCR擴增反應的上游引物的核苷酸序列為SEQ?ID?NO.3，下游引物的核苷酸序列為SEQ?ID?NO.4。

5.利用權利要求1所述豬瘟病毒抗體競爭AlphaLISA檢測試劑盒檢測豬瘟病毒抗體的非疾病診斷目的的檢測方法，包括以下步驟：

1）反應板的待測孔中每孔加入1μL待測樣本，對照孔中加入1μL?1×稀釋緩沖液；

2）每孔加入5μL?180nM/L帶His標簽的豬瘟病毒E2蛋白抗原和5μL?100nM/L豬瘟病毒E2蛋白單克隆抗體，1000rpm?離心10?sec，室溫23℃避光孵育1h；?

3）每孔加入80μg/mL受體微珠4?μL?、80μg/mL供體微珠5μL，1000rpm?離心10?sec，室溫23℃避光孵育30?min；

4）結果讀取：將反應板置Enspire（PE）AlphaLISA檢測系統中讀值。