[發明專利]一種對蝦白斑癥病毒雙抗體夾心ELISA檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201310472419.2
• 申請日: 2013-10-11
• 公開（公告）號: CN103497250A
• 公開（公告）日: 2014-01-08
• 發明（設計）人: 戰文斌;唐小千;繩秀珍;劉鹿山;邢婧
• 申請（專利權）人: 中國海洋大學
• 主分類號: C07K16/08
• 分類號: C07K16/08;C12N5/20;G01N33/577
• 代理公司: 青島海昊知識產權事務所有限公司 37201
• 代理人: 王鐸

1.?一種檢測對蝦白斑癥病毒的單克隆抗體，其特征在于所述單克隆抗體是由名稱為：雜交瘤細胞WSSV-3B7，保藏號為CCTCC?NO:?C201398，保藏單位為：中國典型培養物保藏中心，保藏日期為：2013年06月24日的雜交瘤細胞分泌的。

2.一種包含權利要求1所述單克隆抗體的對蝦白斑癥病毒雙抗體夾心ELISA檢測試劑盒。

3.根據權利要求2所述的檢測試劑盒，其特征在于它包含兔抗WSSV多抗作為捕獲抗體、鼠抗WSSV單抗WSSV-3B7作為檢測抗體，以及包被捕獲抗體的酶標板、封閉液、洗滌液、堿性磷酸酶標記的羊抗鼠IgG抗體、底物顯色液。

4.一種對蝦白斑癥病毒雙抗體夾心ELISA檢測方法，其特征在于它包括以下步驟：（1）加待檢樣品：取試劑盒中包被有捕獲抗體的酶標板，向其中加入經過前處理的待檢樣品，每孔100?μL，每個樣品3個重復，37?℃孵育1?h；（2）檢測抗體孵育：棄去板內液體，洗滌酶標板，每孔加入100?μL檢測抗體，37?℃孵育1?h；（3）酶標二抗孵育：棄去板內液體，洗滌酶標板，每孔加入100?μL堿性磷酸酶標記羊抗鼠IgG抗體，37?℃孵育1?h；（4）顯色與OD測定：棄去板內液體，洗滌酶標板，每孔加入200?μL底物顯色液，37?℃條件下孵育發色15?min，每孔加入50?μL?2?mol/L的NaOH溶液終止反應，用酶標儀測定OD₄₀₅值；（5）標準方程的建立：使用酶標儀測定已知濃度的白斑癥病毒溶液，得到對應的OD₄₀₅-WSSV濃度對數值，擬合得出線性標準線性方程y=5.9625x+0.9209；（6）待測樣品的測定：將測得的待測樣品的OD₄₀₅值作為x值代入上述線性標準線性方程計算出的y值，即為WSSV濃度的對數值，進而計算出待測樣品中WSSV的濃度。

5.根據權利要求4所述的檢測方法，其特征在于所述待檢樣品的前處理方法如下：取少量患病對蝦組織，按每1?g組織加入2?mL?0.01mol/L的磷酸鹽緩沖液，冰浴研磨3~5?min，于4?℃下4?000?rpm離心10?min，上清液在室溫靜置1?h后作為待檢樣品。