[發(fā)明專利]分枝桿菌快速藥敏檢測(cè)方法及檢測(cè)靶標(biāo)

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310471718.4
• 申請(qǐng)日: 2013-10-10
• 公開（公告）號(hào): CN103555828A
• 公開（公告）日: 2014-02-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 崔振玲;胡忠義;程松;張長明;于明輝
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海市肺科醫(yī)院;上海仁度生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/32
• 代理公司: 上海申新律師事務(wù)所 31272
• 代理人: 竺路玲

1.一種用于分枝桿菌快速藥敏檢測(cè)的靶標(biāo)，其特征在于，所述靶標(biāo)選自一種或幾種核糖體RNA的間隔序列，所述核糖體RNA的間隔序列選自5s?rRNA與16s?rRNA之間的間隔序列、16s?rRNA與23s?rRNA之間的間隔序列、及含有此部分序列全部或者部分的序列中的任意一種作為擴(kuò)增或者檢測(cè)靶標(biāo)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靶標(biāo)，其特征在于，所述分枝桿菌為結(jié)核分枝桿菌。

3.一種分枝桿菌快速藥敏檢測(cè)方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：以權(quán)利要求1所述任意一種或幾種靶標(biāo)RNA序列設(shè)計(jì)RNA探針和引物，在逆轉(zhuǎn)錄酶和RNA聚合酶的作用下，對(duì)靶標(biāo)RNA進(jìn)行RNA擴(kuò)增，通過比較對(duì)照組和加藥組內(nèi)靶標(biāo)RNA量的差異，判斷藥物敏感性。

4.根據(jù)權(quán)利要求3快速藥敏檢測(cè)方法，其特征在于，所述的RNA探針的兩端用熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán)進(jìn)行標(biāo)記。

5.根據(jù)權(quán)利要求4快速藥敏檢測(cè)方法，其特征在于，所述的RNA引物中，其中一條引物與所述靶標(biāo)RNA序列相匹配，并且?guī)в蠺7啟動(dòng)子；另一條引物為合成cDNA互補(bǔ)鏈的引物。

6.根據(jù)權(quán)利要求4快速藥敏檢測(cè)方法，其特征在于，在所述RNA擴(kuò)增過程中，每一次擴(kuò)增循環(huán)檢測(cè)一次熒光信號(hào)，共檢測(cè)至少30個(gè)循環(huán)；

以檢測(cè)到的熒光信號(hào)值的log值為縱坐標(biāo)，循環(huán)數(shù)為橫坐標(biāo)，進(jìn)行繪圖，確定檢測(cè)曲線達(dá)到閾值所需的循環(huán)數(shù)，即dt值；其中加藥組dt減去對(duì)照組dt得到的Δdt與判斷界值對(duì)比，如果大于判斷界值則判斷為敏感，如果小于判斷界值則判斷為耐藥。

7.根據(jù)權(quán)利要求4快速藥敏檢測(cè)方法，其特征在于，所述靶標(biāo)選自5s?rRNA與16s?rRNA之間的間隔序列、16s?rRNA與23s?rRNA之間的間隔序列、及含有此部分序列全部或者部分的序列中的任意一種作為擴(kuò)增或者檢測(cè)靶標(biāo)。

8.一種分枝桿菌快速藥敏檢測(cè)試劑盒，其特征在于，包括針對(duì)權(quán)利要求1所述任意一種或幾種檢測(cè)靶標(biāo)設(shè)計(jì)的RNA引物和RNA探針。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的試劑盒，其特征在于，所述RNA引物和RNA探針為：

正向引物：5’-GTCTTGACTCCATTGCCGGA-3’；

反向引物：5’-TGACAAAACAAACGGCCACG-3’；

探針序列：5’-CGUGGAUUAGACUGGCAGCCACG-3’。

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的試劑盒，其特征在于，所述RNA引物和RNA探針為：

正向引物：5’-CCGTGAGGGGTTCTTGTCTG-3’；

反向引物：5’-AAGTCCGAGTGTTGCCTCAG-3’；

探針序列：5’-CGACGGCAACACUCGGACUUGGUCG-3’。