[發(fā)明專利]蛹蟲草素在豬小卵泡卵母細胞體外成熟培養(yǎng)中的應用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201310471237.3 | 申請日： | 2013-10-06 |
| 公開（公告）號： | CN103525759A | 公開（公告）日： | 2014-01-22 |
| 發(fā)明（設計）人： | 高妍;劉慧玉;張嘉保;張永宏;翟博;張連江;袁寶;權福實;劉殿峰 | 申請（專利權）人： | 吉林大學 |
| 主分類號： | C12N5/075 | 分類號： | C12N5/075;C12R1/91 |
| 代理公司： | 吉林長春新紀元專利代理有限責任公司 22100 | 代理人： | 魏征驥 |
| 地址： | 130012 吉*** | 國省代碼： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 蟲草 卵泡 細胞 體外 成熟 培養(yǎng) 中的 應用 | ||
【權利要求書】：
1.蛹蟲草素在豬小卵泡卵母細胞體外成熟培養(yǎng)中的應用。
2.一種豬小卵泡卵母細胞體外成熟培養(yǎng)的方法，包括下列步驟：
（1）豬小卵泡卵母卵丘復合體的收集
卵巢采于剛屠宰母豬的卵巢，放入含75mg/ml青霉素和50mg/ml鏈霉素的37℃生理鹽水中，并在2小時之內用生理鹽水清洗2～3次；在無菌操作室內用18號針頭的注射器抽取直徑為<3mm卵泡的卵母卵丘復合體，在顯微鏡下挑取有3～5層顆粒細胞包裹，細胞質均勻，透明帶完整的卵丘卵母細胞復合體；
（2）豬小卵泡卵母細胞體外成熟培養(yǎng)液的配制及培養(yǎng)
配制培養(yǎng)液，基礎培養(yǎng)基為TCM-199，平衡之前加入0.1%PVA(w/v)，3.05mM?D-葡萄糖,1mM丙酮酸鈉，0.57mM半胱氨酸,10ng/ml?EGF,10IU/ml?PMSG，10IU/ml?hCG，75mg/ml青霉素，50mg/ml鏈霉素，最后添加蛹蟲草素終濃度為2μg/ml；
先用Hepes-TL-PVA洗2次之后，用平衡2h以上的培養(yǎng)液2次，培養(yǎng)條件為5%CO2，溫度39℃和最大相對飽和濕度；培養(yǎng)44小時至MⅡ時，卵母細胞排出第一極體即為成熟；收集卵母卵丘復合體，以0.1%濃度的透明質酸酶處理2min。
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