[發明專利]一種植物乳桿菌、其細菌素以及培養與分離純化方法

有效

• 申請號: 201310470098.2
• 申請日: 2013-10-10
• 公開（公告）號: CN103667106A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發明（設計）人: 陸兆新;胡美忠;呂鳳霞;別小妹;張充;趙海珍
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P21/02;C07K7/06;C07K14/335;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/20;C07K1/16;A23L3/3526;A61K38/08;A61K38/16;A61P31/00;C12R1/25
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 李紀昌

1.一種植物乳桿菌（Lactobacillus?plantarum）163，菌種保藏號為CGMCC?NO.8224。

2.一種細菌素，其特征在于，由權利要求1所述的植物乳桿菌（Lactobacillus?plantarum）163發酵得到。

3.根據權利要求2所述的細菌素，其特征在于，具有SEQ?ID?NO.1所示的氨基酸序列。

4.根據權利要求2所述的細菌素，其特征在于，具有SEQ?ID?NO.2所示的氨基酸序列。

5.一種權利要求2所述的細菌素的制備方法，其特征在于，由植物乳桿菌（Lactobacillus?plantarum）163通過下述步驟培養發酵得到：

（1）植物乳桿菌（Lactobacillus?plantarum）163種子液制備：將保藏的菌種，接種于MRS液體培養基中，37℃靜置培養12-16?h；

（2）植物乳桿菌（Lactobacillus?plantarum）163發酵：將活化的種子液，按體積百分比為1?%接種于MRS液體培養基或者白菜番茄培養基，在MRS液體培養基靜置培養24?h或白菜番茄培養基靜置培養30?h后，5000?rpm離心即得含細菌素的發酵液。

6.根據權利要求5所述的細菌素的制備方法，其特征在于，步驟（2）中所述的白菜番茄培養基配方為葡萄糖10?g，白菜汁200?mL，番茄50?mL，蒸餾水750?mL，pH?6.5。

7.一種權利要求2或3或4所述的細菌素的分離純化方法，其特征在于，先將植物乳桿菌（Lactobacillus?plantarum）163進行培養發酵，然后采取以下步驟進行：

（1）硫酸銨沉淀純化：先將植物乳桿菌?MRS發酵液濃縮，濃縮液加入粉末狀硫酸銨至飽和度60%，攪拌均勻，?4℃下離心完全后取上清液繼續加入粉末狀硫酸銨至飽和度85%，攪拌均勻，?4℃下離心完全，得沉淀，沉淀用蒸餾水溶解；

（2）Sephadex?G25純化：將硫酸銨沉淀下來的樣品進行濃縮，吸取樣品，打開裝好Sephadex?G25柱材料的柱下面的閥門，打開恒流泵，用純凈水充分洗脫，調節流速，利用自動收集器收集餾分；

（3）Sephadex?LH-20純化：Sephadex?LH-20裝柱，G25純化出來的活性餾分凍干后加入蒸餾水溶解，上樣，用80?%甲醇洗脫，流速1.5?mL/9?min，每餾分接1.5?mL，收集餾分，純化后得到兩個活性洗脫峰；

（4）HPLC純化：第一個活性洗脫峰，利用反相高效液相色潽法純化，純化條件：C18柱，A:水+0.1?%TFA，B：乙腈+0.1?%TFA，Time：60?min，A:?95?%-5?%，B:5?%-95?%?梯度洗脫，波長：267?nm，流速0.4?mL/min；第二個活性洗脫峰，純化條件：95%A+5%B等度洗脫，A：水+0.1%TFA，B：乙腈+0.1%TFA，時間：40min，柱子：C18柱，流速3mL/min，檢測波長267nm。

8.權利要求2或3或4所述的細菌素在食品防腐中的應用。

9.權利要求2或3或4所述的細菌素在制備抗菌性藥物中的應用。