[發明專利]N-乙酰葡糖胺轉移酶突變體及其應用

有效

• 申請號: 201310465011.2
• 申請日: 2013-09-30
• 公開（公告）號: CN103589695A
• 公開（公告）日: 2014-02-19
• 發明（設計）人: 李榮杰;徐斌;汪本助
• 申請（專利權）人: 安徽豐原發酵技術工程研究有限公司
• 主分類號: C12N9/10
• 分類號: C12N9/10;C12N15/54;C12N1/21;C12N15/70;C12P19/26;C12R1/19
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

1.一種N-乙酰葡糖胺轉移酶突變體，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ?ID?No.1所示，或該序列經替換、缺失或添加一個或幾個氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。

2.編碼權利要求1所述N-乙酰葡糖胺轉移酶突變體的基因。

3.如權利要求2所述的基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ?ID?No.2所示。

4.含有權利要求2或3所述基因的載體。

5.含有權利要求2或3所述基因的轉基因細胞系。

6.含有權利要求2或3所述基因的工程菌。

7.如權利要求6所述的工程菌，其特征在于，出發菌株為大腸桿菌。

8.權利要求1所述N-乙酰葡糖胺轉移酶突變體在N-乙酰氨基葡萄糖合成中的應用。

9.一種利用大腸桿菌發酵生產N-乙酰氨基葡萄糖的方法，其特征在于，在大腸桿菌中過表達權利要求2或3所述基因，從而提高N-乙酰氨基葡萄糖的發酵產量。

10.權利要求1所述N-乙酰葡糖胺轉移酶突變體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）PCR擴增編碼所述N-乙酰葡糖胺轉移酶突變體的基因；

2）將步驟1）所得PCR產物連接表達載體pET-28b；

3）連接產物轉入大腸桿菌感受態細胞，獲得表達產物；

其中，步驟1）中PCR擴增所用引物為：

正向引物：5′-GATCGGATCCATGAGCTTACCCGATGGATTTTATATAAGGC-3′；

反向引物：5′-GATCCTCGAGCTATTTTCTAATTTGCATTTCCACGCCTGC-3′。