[發明專利]一種固態發酵生產益生菌孢子粉的方法

有效

• 申請號: 201310464827.3
• 申請日: 2013-10-09
• 公開（公告）號: CN103468630A
• 公開（公告）日: 2013-12-25
• 發明（設計）人: 向洋;向夢蘭
• 申請（專利權）人: 長沙理工大學
• 主分類號: C12N3/00
• 分類號: C12N3/00;A23K1/16;C12R1/125;C12R1/25;C12R1/865;C12R1/69;C12R1/01
• 代理公司: 長沙星耀專利事務所 43205
• 代理人: 李展明

技術領域

本發明涉及益生菌發酵生產技術領域，尤其是涉及一種固態發酵生產益生菌孢子粉的方法。

背景技術

益生菌是指當攝入充足的數量后,能對宿主產生一種或多種由論證的功能性健康益處的活的微生物，主要包括乳桿菌屬、雙歧桿菌屬、丙酸菌、芽孢桿菌、埃希氏菌以及酵母屬等。

益生菌能促進機體微生物菌群和酶的平衡以及刺激特異性和非特異性的免疫機制,達到預防某些疾病、促進發育、增強體質、延緩衰老和延長壽命的目的。

CN?103146616?A公開了一種制備復合乳酸菌制劑的方法及應用。所述方法包括農副產品廢渣預處理、菌株擴大培養、復合菌株液態培養、復合菌株液固態偶聯發酵。該發明克服了當前益生菌飼料添加劑產品存在的性能穩定性差、生產成本高的問題，其不僅使復合乳酸菌制劑產品中的菌株競爭力增強，宿主定植率得到提高，而且，該方法能大幅度減小成本，并有效利用農副產品廢渣資源，使其成為飼料添加劑成分中的重要組成部分，在一定程度上解決了資源浪費和環境污染等突出問題，可成功應用于飼料方面。但該方法發酵效率低，成本高，得到的復合乳酸菌制劑的活菌總數僅達7.?8~8.?5?×?10⁹?cfu/ml，無法滿足市場的要求。

CN?103211085?A公開了一種飼用高效復合益生菌劑及制備方法，屬于生物技術領域。所述的復合益生菌劑由地衣芽抱桿菌(Baci11us1icheniformis),嗜熱乳酸鏈球菌(Streptococcus?thermophilus)、釀酒釀酒酵母(Saccharomycerevisiae?Hansen)分別發酵培養后按比例混合而成，有效微生物數目達到8~120×10⁸CFU/mL；所述復合益生菌劑菌株間配伍科學合理，能殺死或抑制動物體內的病原菌，促進飼料的消化吸收，能大大減少飼料中抗生素的使用。但該方法制備工藝復雜，且益生菌含量偏低。

目前，益生菌制劑應用于養殖生產，然而，在制備工藝上大部分采用液態發酵制備，發酵控制條件苛刻，生產成本高，少數采用固態發酵制備的工藝復雜，得到的益生菌含量低。

發明內容

本發明要解決的技術問題是：提供一種固態發酵生產益生菌孢子粉的方法，縮短發酵周期、降低生產能耗，提高益生菌的發酵效率，得到含菌量高的復合型益生菌。

本發明解決其技術問題采用的技術方案為：一種固態發酵生產益生菌孢子粉的方法，包括以下步驟：?

a）培養基制備：

茄子瓶培養基：組成成分為馬鈴薯20%、蛋白胨0.5%、葡萄糖或蔗糖2%、磷酸二氫鉀0.05%、硫酸鎂0.03%、瓊脂1.5~2%、pH為6.5~7.0；

種子擴大培養的培養基：組成成分為米糠7~10%或麥麩2~10%、花生粕或豆粕2~5%、蛋白胨0.5~1.0%、蔗糖2%、瓊脂2%，pH為6.0~7.0；

固體發酵培養基：由稻殼和麥麩組成，組成比例為3:7~5:5，固體培養基的含水率為50%?wt～60%?wt，pH自然；

b）益生菌菌種活化：將冷凍管中的菌體或斜面培養保存的菌種轉接至茄子瓶內培養；?

c）益生菌種懸液的制備：將步驟b）培養好的細菌或真菌按1:100~1:50的接種量轉接至種子罐中進行固態培養，罐壓為0.05MPa，通風量為0.1~0.2vvm，攪拌速度為0.1~0.2rpm，細菌在34~39℃培養24~36h后轉至適量的無菌水中，使菌懸液含菌量在1.0~1.5×10⁷cfu/g；真菌在25~30℃培養44~60h至適量的無菌水中，使菌懸液含菌量在3.0~5.0×10⁶cfu/g；?

d）益生菌固態發酵培養：

將步驟c）得到的細菌菌懸液按固體發酵培養基的重量1~2%轉接至固體發酵培養基中，罐壓為0.02~0.05MPa，通風量為0.2~0.25vvm，攪拌速度為0.8~1.2rpm，培養溫度為34~39℃，物料濕度控制在55~65%，45~55h內每4h取樣檢測物料的含菌量，當含菌量≥5.0×10⁹cfu/g且活菌率高于95%時，停止發酵；