[發明專利]一種固態發酵生產益生菌孢子粉的方法

有效

• 申請號: 201310464827.3
• 申請日: 2013-10-09
• 公開（公告）號: CN103468630A
• 公開（公告）日: 2013-12-25
• 發明（設計）人: 向洋;向夢蘭
• 申請（專利權）人: 長沙理工大學
• 主分類號: C12N3/00
• 分類號: C12N3/00;A23K1/16;C12R1/125;C12R1/25;C12R1/865;C12R1/69;C12R1/01
• 代理公司: 長沙星耀專利事務所 43205
• 代理人: 李展明

1.?一種固態發酵生產益生菌孢子粉的方法，其特征在于，包括以下步驟：

a）培養基制備：

茄子瓶培養基：組成成分為馬鈴薯20%、蛋白胨0.5%、葡萄糖或蔗糖2%、磷酸二氫鉀0.05%、硫酸鎂0.03%、瓊脂1.5~2%、pH為6.5~7.0；

種子擴大培養的培養基：組成成分為米糠7~10%或麥麩2~10%、花生粕或豆粕2~5%、蛋白胨0.5~1.0%、蔗糖2%、瓊脂2%，pH為6.0~7.0；

固體發酵培養基：由稻殼和麥麩組成，組成比例為3:7~5:5，固體培養基的含水率為50%?wt～60%?wt，pH自然；

b）益生菌菌種活化：將冷凍管中的菌體或斜面培養保存的菌種轉接至茄子瓶內培養；?

c）益生菌種懸液的制備：將步驟b）培養好的細菌或真菌按1:100~1:50的接種量轉接至種子罐中進行固態培養，罐壓為0.05MPa，通風量為0.1~0.2vvm，攪拌速度為0.1~0.2rpm，細菌在34~39℃培養24~36h后轉至適量的無菌水中，使菌懸液含菌量在1.0~1.5×10⁷cfu/g；真菌在25~30℃培養44~60h至適量的無菌水中，使菌懸液含菌量在3.0~5.0×10⁶cfu/g；?

d）益生菌固態發酵培養：

將步驟c）得到的細菌菌懸液按固體發酵培養基的重量1~2%轉接至固體發酵培養基中，罐壓為0.02~0.05MPa，通風量為0.2~0.25vvm，攪拌速度為0.8~1.2rpm，培養溫度為34~39℃，物料濕度控制在55~65%，45~55h內每2h取樣檢測物料的含菌量，當含菌量≥5.0×10⁹cfu/g且活菌率高于95%時，停止發酵；

將步驟c）得到的真菌菌懸液按固體發酵培養基的重量2~4%轉接至固體發酵培養基中，罐壓為0.02~0.05MPa，通風量為0.2~0.25vvm，攪拌速度為0.8~1.2rpm，培養溫度為25~30℃，物料濕度控制在55~65%，57~66h內每2h取樣檢測物料的活菌量，當活菌量≥5.0×10⁸cfu/g且活菌率高于95%時，停止發酵；

e）益生菌孢子粉干燥及粉碎:在發酵結束后，將發酵罐的溫度調至60℃、攪拌速度調至3~5rpm，干燥至孢子粉的含水率低于12%，并通過提高攪拌速度進行粉碎；?

f）益生菌高孢粉抽提：采用旋風分離集孢器進行抽提得到高孢粉，然后根據所需的含孢量，并在高孢粉中加入填充料，混合，再根據益生菌孢子粉的配方將細菌和真菌高孢粉按重量比例為8:2~5:5進行混合過篩得到益生菌孢子粉；?

g）益生菌孢子粉成品質檢及包裝。

2.如權利要求1所述一種固態發酵生產益生菌孢子粉的方法，其特征在于，所述步驟a）中的茄子瓶培養基和種子擴大培養的培養基在121℃，0.1MPa滅菌15~20min，固態發酵培養基在90~95℃，滅菌60~80min，備用。

3.如權利要求1所述一種固態發酵生產益生菌孢子粉的方法，步驟b)中所述的益生菌活化培養條件為：細菌在32±1℃靜置培養24h，真菌在25±1℃靜置培養48h。

4.如權利要求1所述一種固態發酵生產益生菌孢子粉的方法，步驟c)中所述的菌懸液含菌量采用血球計數板直接計數法進行計數。

5.如權利要求1所述一種固態發酵生產益生菌孢子粉的方法，所述步驟c)中細菌的培養時間為24~28h，真菌的培養時間為48~56h。

6.如權利要求1所述一種固態發酵生產益生菌孢子粉的方法，步驟d)中所述的發酵罐為集發酵、干燥粉碎為一體的臥式固態生物反應器。