[發明專利]粗枝云杉體細胞胚萌發前的干化處理方法

有效

• 申請號: 201310462072.3
• 申請日: 2013-09-30
• 公開（公告）號: CN103497928A
• 公開（公告）日: 2014-01-08
• 發明（設計）人: 王軍輝;張建偉;張守攻
• 申請（專利權）人: 中國林業科學研究院林業研究所
• 主分類號: C12N5/04
• 分類號: C12N5/04
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

1.一種粗枝云杉體細胞胚萌發前的干化處理方法，包括：在獲得粗枝云杉的體細胞胚后，對體細胞胚采用“濾紙橋法”、“空培養容器法”或“濾紙法”的方式進行干化處理0～21天，然后再進行萌發。

2.根據權利要求1所述的粗枝云杉體細胞胚萌發前的干化處理方法，其特征在于，對體細胞胚采用“空培養容器法”或“濾紙法”的方式進行干化處理；優選對體細胞胚采用“濾紙法”的方式進行干化處理。

3.根據權利要求1或2所述的粗枝云杉體細胞胚萌發前的干化處理方法，其特征在于，所述的“濾紙橋法”為：將粗枝云杉體細胞胚放置在一個培養容器內，然后將該培養容器放置在另一個更大的培養容器內，在更大的培養容器內放置水，用濾紙覆蓋在放置有粗枝云杉體細胞胚的培養容器上做成“濾紙橋”，最后將更大的培養容器封口；

所述的“空培養容器法”為：將粗枝云杉體細胞胚放置在一個培養容器內，然后將該培養容器放置在另一個更大的培養容器內，在更大的培養容器內放置水，最后將更大的培養容器封口；

所述的“濾紙法”為：將粗枝云杉體細胞胚放置在一個墊有一層以上濾紙的培養容器內，然后將該培養容器放置在另一個更大的培養容器內，在更大的培養容器內放置水，最后將更大的培養容器封口。

4.根據權利要求3所述的粗枝云杉體細胞胚萌發前的干化處理方法，其特征在于，所述的“濾紙法”中，放置粗枝云杉體細胞胚的培養容器內墊有濾紙的層數為1～4層，優選3層。

5.根據權利要求1～4任意一項所述的粗枝云杉體細胞胚萌發前的干化處理方法，其特征在于，干化處理1～14天，優選7～14天，更優選14天。

6.根據權利要求5所述的粗枝云杉體細胞胚萌發前的干化處理方法，其特征在于，對體細胞胚進行干化處理的條件還包括：溫度為23～25℃；光照強度為15～18μmol·m^-2·s^-1。

7.根據權利要求1～6任意一項所述的粗枝云杉體細胞胚萌發前的干化處理方法，其特征在于，采用液體懸浮增殖或半固體增殖的胚性愈傷組織分別進行體細胞胚的分化培養，獲得粗枝云杉的體細胞胚。

8.根據權利要求1～7任意一項所述的粗枝云杉體細胞胚萌發前的干化處理方法，其特征在于，該方法還包括：在對粗枝云杉的體細胞胚進行干化處理后，對體細胞胚進行干化標記，然后再進行萌發；

對體細胞胚進行干化標記的方式為：根據干化處理后體細胞胚顏色的變化，將其標記成三種類型：“無變化型”，“淡紅色胚根型”和“綠色子葉和胚軸及紅色胚根型”。

9.一種粗枝云杉體細胞胚萌發前的干化處理方法，包括：對粗枝云杉的體細胞胚進行干化處理后，再進行干化標記，然后進行萌發；所述干化標記的方式為：根據體細胞胚顏色的變化情況，將其標記成三種類型：“無變化型”，“淡紅色胚根型”和“綠色子葉和胚軸及紅色胚根型”。

10.根據權利要求9所述的粗枝云杉體細胞胚萌發前的干化處理方法，其特征在于，標記為“綠色子葉和胚軸及紅色胚根型”的體細胞胚，其干化時間為0～21天，優選1～14天，更優選7～14天，最優選14天。

11.根據權利要求8～10任意一項所述的粗枝云杉體細胞胚萌發前的干化處理方法，其特征在于，對標記為“淡紅色胚根型”和“綠色子葉和胚軸及紅色胚根型”的體細胞胚進行萌發；優選對標記為“綠色子葉和胚軸及紅色胚根型”的體細胞胚進行萌發。

12.根據權利要求1～11任意一項所述的粗枝云杉體細胞胚萌發前的干化處理方法，其特征在于，對體細胞胚進行萌發，所用的培養基為：1/4LM培養基，加入蔗糖20g·L^-1、凝膠6g·L^-1和活性炭2g·L^-1，再附加谷氨酰胺500mg·L^-1和水解酪蛋白1g·L^-1。