[發明專利]用于DNA斷裂和標記的固定化的轉座酶復合體

有效

• 申請號: 201310459721.4
• 申請日: 2013-09-30
• 公開（公告）號: CN103710323B
• 公開（公告）日: 2019-06-14
• 發明（設計）人: A.S.貝爾耶夫
• 申請（專利權）人: 安捷倫科技有限公司
• 主分類號: C12N9/12
• 分類號: C12N9/12;C12N15/10;C12Q1/6806
• 代理公司: 北京坤瑞律師事務所 11494
• 代理人: 封新琴

1.一種結合固體基質的哈氏弧菌(Vibrio harveyi)轉座酶復合體，所述復合體包含：

包含至少一個哈氏弧菌轉座酶的轉座酶組分；

包含至少一個寡核苷酸銜接子的寡核苷酸銜接子組分，

其中每個銜接子包含至少一個雙鏈部分，該雙鏈部分含有所述復合體的轉座酶的識別序列，并且

其中每個復合體的所述銜接子中的至少一個結合有特異性結合對的成員；

包含特異性結合對的接頭組分，該特異性結合對的一個成員結合于銜接子，且該特異性結合對的另一個成員結合于固體基質；以及

固體基質，

其中當所述復合體包含一個轉座酶時，其與一個銜接子結合；而當所述復合體包含多于一個轉座酶時，至少兩個銜接子結合于這些轉座酶。

2.權利要求1的復合體，其中所述復合體包含：

包含兩個轉座酶的轉座酶組分；

包含兩個寡核苷酸銜接子的寡核苷酸銜接子組分，

其中每個銜接子包含至少一個雙鏈部分，該雙鏈部分含有所述復合體的轉座酶的識別序列，

其中所述銜接子中的一個結合有特異性結合對的成員，并且

其中所述銜接子中的一個結合于一個轉座酶，而另一個銜接子結合于另一個轉座酶；

包含特異性結合對的接頭組分，所述特異性結合對的一個成員結合于銜接子，而該特異性結合對的另一個成員結合于固體基質；以及

固體基質。

3.權利要求1的復合體，其中所述轉座酶組分包含兩個或更多個不同的轉座酶。

4.一種組合物，其包含：

結合固體基質的哈氏弧菌轉座酶復合體，其包含：

包含至少一個哈氏弧菌轉座酶的轉座酶組分；以及

包含至少一個寡核苷酸銜接子的寡核苷酸銜接子組分，

其中每個銜接子包含至少一個雙鏈部分，該雙鏈部分含有所述復合體的轉座酶的識別序列，

其中每個復合體的銜接子中的至少一個結合有特異性結合對的成員；

包含特異性結合對的接頭組分，該特異性結合對的一個成員結合于銜接子，且該特異性結合對的另一個成員結合于固體基質；和

固體基質，

以及

細胞裂解物；

其中，當所述復合體包含一個轉座酶時，其與一個銜接子結合；且當所述復合體包含多于一個轉座酶時，至少兩個銜接子結合于這些轉座酶。

5.權利要求4的組合物，還包含核酸酶抑制劑。

6.權利要求5的組合物，其中所述核酸酶抑制劑是二價陽離子螯合劑。

7.權利要求4的組合物，其中所述復合體包含：

包含兩個轉座酶單位的轉座酶組分；以及

包含兩個寡核苷酸銜接子的寡核苷酸銜接子組分，

其中每個銜接子包含至少一個雙鏈部分，該雙鏈部分含有所述復合體的轉座酶的識別位點，并且

其中所述銜接子中的一個結合有特異性結合對的成員，該成員結合至結合于固體基質的該特異性結合對的另一個成員，并且

其中一個銜接子結合于一個轉座酶，且另一個銜接子結合于另一個轉座酶。

8.權利要求4的組合物，其中所述轉座酶組分包含兩個或更多個不同的轉座酶。

9.一種產生或純化具有DNA斷裂活性的結合固體基質的哈氏弧菌轉座酶復合體的方法，所述方法包括：

裂解含有至少一個哈氏弧菌轉座酶的細胞以生成細胞裂解物；

在細胞裂解物中添加至少一個具有至少一個雙鏈部分的寡核苷酸銜接子，所述雙鏈部分含有至少一個所述哈氏弧菌轉座酶的識別序列，且該銜接子結合有特異性結合對的一個成員；以及

允許有充足時間供所述銜接子結合所述哈氏弧菌轉座酶，

使所述裂解物與結合有所述特異性結合對的配偶的固體基質接觸，

使所述裂解物和固體基質處于允許該特異性結合對成員相互結合的條件下，

由此生成結合固體基質的哈氏弧菌轉座酶復合體。