[發明專利]一種誘導茄子花藥再生單倍體植株的方法有效

申請號：	201310459357.1	申請日：	2013-09-28
公開（公告）號：	CN103444552A	公開（公告）日：	2013-12-18
發明（設計）人：	王春麗;談太明;徐長城;黃樹蘋;談杰;張敏;陳霞	申請（專利權）人：	武漢市蔬菜科學研究所
主分類號：	A01H4/00	分類號：	A01H4/00
代理公司：	武漢宇晨專利事務所 42001	代理人：	王敏鋒
地址：	430000 湖***	國省代碼：	湖北;42
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種誘導茄子花藥再生單倍體植株方法
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【說明書】：

技術領域

本發明屬于植物生物技術領域，具體涉及一種誘導茄子花藥再生單倍體植株的方法。

背景技術

茄子（Solanum?melongena?Linn），屬于茄科（Solanaceae）茄屬（2n=2x=24），起源于亞洲東南亞熱帶地區，是歐洲、亞洲和北美洲的重要蔬菜品種之一。它不僅具有較高的營養價值，且食用方法多樣，是一種可以干鮮結合、周年供應、經濟實惠的大宗蔬菜，深受廣大生產者和消費者的歡迎。中國是世界上最大的茄子生產國，因此，茄子的遺傳育種工作對于實際生產意義重大。

在茄子雜交育種工作中，自交系的選育是非常重要的工作，但往往存在選育周期長、選擇效率低等問題。單倍體育種可以大大提高后代選擇的效率，縮小育種群體規模，縮短育種年限，加快育種進程。

花藥離體培養是以花藥為外植體，通過無菌操作技術，接種在人工培養基上，誘導其分化出愈傷組織或胚狀體，隨后使愈傷組織分化成完整的植株。花藥培養不需要分離出花粉，程序比較簡化，因而是誘導人工單倍體的主要方法之一。

利用花藥培養可快速獲得純系和突變體，創新種質資源，對茄子遺傳育種及品種改良具有重要意義。70年代初，Riana等成功通過茄子花藥培養經愈傷組織途徑成苗。茄子不論是花藥還是花粉培養，都已有一些成功的報道。目前，有關茄子花藥培養的研究大多集中在如何提高愈傷組織和胚狀體的誘導頻率上.而對從愈傷組織誘導產生單倍體植株的研究則很少。許多愈傷組織不能正常的生長發育而只產生根，不分化芽，成苗率低。

發明內容

本發明的目的在于克服現有花藥培養技術中愈傷組織誘導率和分化率低，培養效果差的問題，是在于提供了一種誘導茄子花藥再生單倍體植株的方法，應用本方法獲得愈傷組織的幾率高，愈傷組織分化頻率高，培養效果好。將本發明花藥培養方法及配套培養基應用于茄子遺傳育種中，可以大大提高了茄子花藥培養效率，豐富了茄子優良基因型個體，完善了茄子單倍體育種途徑，縮短了育種周期，為加快茄子遺傳育種和茄科作物花藥離體培養研究提供技術和理論依據。

為了實現上述目的，本發明采用以下技術方案：

一種誘導茄子花藥再生單倍體植株的方法，其步驟是：

1）從茄子花期開始，于晴天上午9:00-10:00從健壯植株上選取發育正常，表面無損傷，經顯微鏡鏡檢小孢子處于單核中期至單核靠邊期的花蕾用于花藥培養，對應花蕾外部形態為花冠低于花萼裂基部1mm-2mm至花冠高于花萼裂基部1mm-2mm，花藥為黃綠色；

2）將花蕾裝于自封袋內置于4℃-5℃冰箱預處理24h-72h；

3）將花蕾外萼剝掉，再用75%（體積百分比）的酒精表面消毒28s-32s，之后用5%（質量百分比）的次氯酸鈉溶液消毒15min-20min，然后用無菌水沖洗3-4次；

4）在無菌濾紙上用鑷子剝取花藥，將花藥柄去除干凈，接種于裝有愈傷組織誘導培養基的培養皿（90mm）中，每皿接種3-5個花蕾的花藥；

5）花藥接種后，置于35℃-37℃高溫黑暗條件下處理6d-7d；

6）于光照強度15001x-20001x、光照時間12h-16h、溫度25℃-28℃下繼續培養，3周左右產生愈傷組織；

7）待愈傷組織長到直徑為5mm-6mm時，切下并接種到愈傷組織增殖培養基上培養增殖；

8）兩周后，選取大小一致，色澤新鮮，淡黃色，質地緊密的愈傷組織轉移至愈傷組織分化培養基上，誘導不定芽發生；

9）待芽苗長至1cm-3cm長時，切下無根小苗，轉接到植株擴繁與繼代培養基上，每30d擴繁繼代一次；

10）根據育種需求和外界環境條件，在移栽大田前1個月將無根小苗轉移至生根培養基上，誘導生根，再生出完整植株。