[發明專利]一種誘導茄子花藥再生單倍體植株的方法

有效

• 申請號: 201310459357.1
• 申請日: 2013-09-28
• 公開（公告）號: CN103444552A
• 公開（公告）日: 2013-12-18
• 發明（設計）人: 王春麗;談太明;徐長城;黃樹蘋;談杰;張敏;陳霞
• 申請（專利權）人: 武漢市蔬菜科學研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 王敏鋒

1.一種誘導茄子花藥再生單倍體植株的方法，其步驟是：

1）從茄子花蕾發育期開始，于晴天上午9:00-10:00從植株上選取發育正常，表面無損傷，經顯微鏡鏡檢小孢子處于單核中期至單核靠邊期的花蕾用于花藥培養，對應花蕾外部形態為花冠低于花萼裂基部1-2?mm至花冠高于花萼裂基部1-2mm，花藥為黃綠色；

2）將花蕾裝于自封袋內置于4-5℃冰箱預處理24?-72?h；

3）將花蕾外萼剝掉，用75%體積百分比的酒精表面消毒28?-32?s，之后用5%質量百分比的次氯酸鈉溶液消毒15?-20?min，然后用無菌水沖洗3-4次；

4）在無菌濾紙上用鑷子剝取花藥，將花藥柄去除干凈，接種于裝有愈傷組織誘導培養基的培養皿中，每皿接種3-5個花蕾的花藥；

5）花藥接種后，置于35-37℃高溫黑暗條件下處理6?-7?d；

6）在光照強度1500?-2000?1x、光照時間12?-16?h、溫度25-28?℃下繼續培養，3周產生愈傷組織；

7）待愈傷組織長到直徑為5?-6?mm?時，切下并接種到愈傷組織增殖培養基上培養增殖；

8）兩周后，選取大小一致，色澤新鮮，淡黃色，質地緊密的愈傷組織轉移至愈傷組織分化培養基上，誘導不定芽發生；

9）待芽苗長至1?-3?cm長時，切下無根小苗，轉接到植株擴繁與繼代培養基上，每30?d擴繁繼代一次；

10）根據育種需求和外界環境條件，在移栽大田前1個月將無根小苗轉移至生根培養基上，誘導生根，再生出完整植株。

2.根據權利要求1所述的一種誘導茄子花藥再生單倍體植株的方法，其特征在于：

????所述的愈傷組織誘導培養基為：MS基本培養基，0.5?mg/L?2，4-D?，1.0?mg/L?KT，30.0?g/L蔗糖，7.5?g/L瓊脂，加水至1L，滅菌前調整培養基的pH至5.8-6.0；

????所述的愈傷組織增殖培養基為：MS基本培養基，30.0?g/L蔗糖，7.5?g/L瓊脂，加水至1L，滅菌前調整培養基的pH至5.8-6.0；

所述的愈傷組織分化培養基為：MS基本培養基，0.01?mg/L?NAA?，2.0?mg/L?ZT，20.0?g/L蔗糖，7.5?g/L瓊脂，加水至1L，滅菌前調整培養基的pH至5.8-6.0；

所述的植株擴繁和繼代培養基為：MS基本培養基，0.01?mg/L?NAA，2.0?mg/L?6-BA，20.0?g/L蔗糖，7.0?g/L瓊脂，加水至1L，滅菌前調整培養基的pH?至5.8-6.0；

????所述的生根培養基為：1/2MS，0.2?mg/L?IBA，30.0?g/L蔗糖，7.0?g/L瓊脂，加水至1L，滅菌前調整培養基的pH至5.8-6.0。