[發明專利]檢測DNMT3A突變位點的方法、引物和試劑盒

有效

• 申請號: 201310459210.2
• 申請日: 2013-09-30
• 公開（公告）號: CN103540659A
• 公開（公告）日: 2014-01-29
• 發明（設計）人: 周曉犢;李文靜;王淑一
• 申請（專利權）人: 武漢艾迪康醫學檢驗所有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 杭州裕陽專利事務所(普通合伙) 33221
• 代理人: 應圣義

1.檢測樣品DNMT3A第882位多態性突變的引物，其特征在于，所述引物包括一對擴增引物，其堿基序列為：

DNMT3A?882-F:?TTCGGCAGAACTAAGCAG

DNMT3A?882-R:?GTCCCTTACACACACGCA?。

2.如權利要求1所述的引物，其特征在于，所述引物還包括一對測序引物，其堿基序列為：

DNMT3A?882-F:?TTCGGCAGAACTAAGCAG

DNMT3A?882-R:?GTCCCTTACACACACGCA。

3.如權利要求1所述的引物，其特征在于，所述多態性突變選自R882H、R882C、?R882P和R882S。

4.一種檢測樣品DNMT3A第882位多態性突變的方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)提取樣品中的基因組DNA；

(2)利用一對擴增引物對(1)中的DNA進行擴增，獲得擴增產物；

(3)利用一對測序引物對(2)中的擴增產物進行測序，獲得所述擴增產物的基因序列；

(4)將(3)中的基因序列與DNMT3A野生型基因序列進行比較，確定所述多態性突變是否存在，其中

所述的一對擴增引物，其堿基序列為：

DNMT3A?882-F:?TTCGGCAGAACTAAGCAG

DNMT3A?882-R:?GTCCCTTACACACACGCA?

所述的一對測序引物，其堿基序列為：

DNMT3A?882-F:?TTCGGCAGAACTAAGCAG

DNMT3A?882-R:?GTCCCTTACACACACGCA?。

5.一種檢測樣品DNMT3A第882位多態性突變的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括樣品基因組DNA抽提試劑；無水乙醇；檢測體系PCR反應液、測序體系反應液、陽性對照品、陰性對照品和空白對照品。

6.如權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述檢測體系PCR反應液包括

dNTPs、KOD?FX?DNA?Polymerase和一對擴增引物DNMT3A882-F和DNMT3A882-R，其中

DNMT3A?882-F:?TTCGGCAGAACTAAGCAG

DNMT3A?882-R:?GTCCCTTACACACACGCA。

7.如權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述測序體系反應液包括測序純化反應液、EDTA、無水乙醇、75%乙醇、HIDI和一對測序引物DNMT3A882-F和DNMT3A882-R，其中

DNMT3A?882-F:?TTCGGCAGAACTAAGCAG

DNMT3A?882-R:?GTCCCTTACACACACGCA。

8.如權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述測序純化反應液包括牛小腸堿性磷酸酶和外切酶I。

9.如權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述陽性對照品為含有DNMT3A序列的溶液，所述陰性對照品為無含有DNMT3A序列的溶液，所述空白對照品為生理鹽水或不加任何物質。

10.如權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述多態性突變選自R882H、R882C、?R882P和R882S。