[發(fā)明專利]檢測人XPD基因熱點(diǎn)突變位點(diǎn)的方法、引物和試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310457040.4
• 申請日: 2013-09-30
• 公開（公告）號: CN103540658A
• 公開（公告）日: 2014-01-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 薛群;李文靜;王淑一;徐建成
• 申請（專利權(quán)）人: 杭州艾迪康醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 杭州裕陽專利事務(wù)所(普通合伙) 33221
• 代理人: 應(yīng)圣義

1.用于檢測檢測人XPD基因熱點(diǎn)突變位點(diǎn)的引物，所述引物包括：

(1)一對用于擴(kuò)增人XPD基因第23外顯子的特異性外側(cè)引物SEQ?NO1和SEQ?NO2，其堿基序列為：

SEQ?NO1：TCTGGATTATACGGACATCTC；

SEQ?NO2：Biotin-TCACCTGACTTCATAAGACCT

(2)?一條特異性內(nèi)側(cè)測序引物SEQ?NO3，其堿基序列為：

SEQ?NO3：GCTAGAATCAGAGGAGACG.。

2.如權(quán)利要求1所述的引物，其特征在于，所述突變位點(diǎn)為Lys751Gln。

3.一種用于檢測檢測人XPD基因熱點(diǎn)突變位點(diǎn)的方法，所述方法包括：

（i）提取樣品中的DNA；

（ii）利用一對特異性外側(cè)擴(kuò)增引物SEQ?NO1和SEQ?NO?2，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲得擴(kuò)增產(chǎn)物，其中SEQ?NO1：TCTGGATTATACGGACATCTC；SEQ?NO2：Biotin-TCACCTGACTTCATAAGACCT；

（iii）將（ii）中的擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳鑒定，確定是否擴(kuò)增成功；

（iv）若擴(kuò)增成功，利用一條特異性內(nèi)側(cè)測序引物SEQ?NO3對所述擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行焦磷酸測序，獲得所述擴(kuò)增產(chǎn)物的基因序列，其中?SEQ?NO3：GCTAGAATCAGAGGAGACG.；

（v）將所述基因序列與人XPD基因第23外顯子野生型基因序列進(jìn)行比對，判斷是否存在熱點(diǎn)突變位點(diǎn)。

4.如權(quán)利要求3所述的方法，步驟(ii)的PCR擴(kuò)增反應(yīng)條件為94℃?5min；98℃?30s、?58℃?30s、68℃?30s，35個(gè)循環(huán)；最后68℃?5min。

5.一種用于檢測人XPD基因熱點(diǎn)突變位點(diǎn)的試劑盒，包括血液DNA抽提試劑、無水乙醇、PCR擴(kuò)增反應(yīng)液、陽性對照品、陰性對照品和空白對照品以及焦磷酸測序反應(yīng)液，其特征在于：所述PCR擴(kuò)增反應(yīng)液包括一對用于擴(kuò)增人XPD基因第23外顯子的外側(cè)特異性擴(kuò)增引物SEQ?NO1和SEQ?NO2，其堿基序列為：

SEQ?NO1：TCTGGATTATACGGACATCTC；

SEQ?NO2：Biotin-TCACCTGACTTCATAAGACCT

所述焦磷酸測序反應(yīng)液包括一條內(nèi)側(cè)特異性測序引物SEQ?NO3，其堿基序列為：

SEQ?NO3：GCTAGAATCAGAGGAGACG.。

6.如權(quán)利要求5所述的試劑盒，所述PCR擴(kuò)增反應(yīng)液還包括2*PCR?Buffer、dNTPs、KOD?FX?DNA?Polymerase和ddH₂O。

7.如權(quán)利要求5所述的試劑盒，所述陽性對照品為含有人XPD基因純合突變樣本DNA的溶液，所述陰性對照品ddH₂O，所述空白對照品為生理鹽水或不加任何物質(zhì)。