[發明專利]性控精液的分離方法

有效

• 申請號: 201310456121.2
• 申請日: 2013-09-29
• 公開（公告）號: CN103525760A
• 公開（公告）日: 2014-01-22
• 發明（設計）人: 帥志強;蘇冠宇
• 申請（專利權）人: 大連金弘基種畜有限公司
• 主分類號: C12N5/076
• 分類號: C12N5/076
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 吳開磊

1.性控精液的分離方法，其特征在于，包括以下步驟：

將原精通過40-60微米過濾器第一次過濾，得到去除精子團及雜物的濾后精液；

檢測所述濾后精液的活力，得到活力為0.6-0.85的待染色濾后精液；

將活力為0.6-0.85的所述待染色濾后精液進行染色，得到染色精液；

將所述染色精液使用流式細胞儀分離，得到含有X染色體的精液和含有Y染色體的精液。

2.根據權利要求1所述的性控精液的分離方法，其特征在于，在所述檢測所述濾后精液的活力，得到活力為0.6-0.85的待染色濾后精液的步驟中，所述檢測所述濾后精液的活力，具體包括：

吸取15-25微升濾后精液滴加在經過32℃-36℃預熱的載玻片上保持0.5-1.5分鐘，然后在200-400倍顯微鏡下觀察所述濾后精液的活力。

3.根據權利要求2所述性控精液的分離方法，其特征在于，在所述將活力為0.6-0.85的所述待染色濾后精液進行染色，得到染色精液的步驟中，具體包括：

將Staining?Talp液和4%Egg?yolk?Talp液分別在32℃-36℃的溫度下預熱10-20分鐘，得到預熱后的Staining?Talp液和預熱后的4%Egg?yolk?Talp液；

在32℃-36℃的溫度下，在所述待染色濾后精液中加入熒光染料，混勻后得到初染精液；

在所述初染精液中加入所述預熱后的Staining?Talp液后混勻，孵育40分鐘-50分鐘，得到孵育后的精液；

在所述孵育后的精液中加入所述預熱后的4%Egg?yolk?Talp液，搖勻后得到所述染色精液。

4.根據權利要求3所述的性控精液的分離方法，其特征在于，在32℃-36℃的溫度下，在所述待染色濾后精液中加入熒光染料，混勻后得到初染精液的步驟，具體包括：

在所述待染色濾后精液中加入抗生素溶液后再加入熒光染料，混勻后得到所述初染精液。

5.根據權利要求4所述的性控精液的分離方法，其特征在于，所述抗生素溶液包括泰勒霉素溶液、慶大霉素溶液和由林肯霉素和壯觀霉素配成的林肯-壯觀溶液；

其中，所述泰勒霉素溶液、所述慶大霉素溶液和所述林肯-壯觀溶液的體積比為3:3:4。

6.根據權利要求4所述的性控精液的分離方法，其特征在于，在所述待染色濾后精液中加入抗生素溶液后再加入熒光染料，混勻后得到所述初染精液的步驟中，具體包括：

在每毫升所述待染色濾后精液中加入20微升所述抗生素溶液后再加入熒光染料混勻后得到所述初染精液。

7.根據權利要求4所述的性控精液的分離方法，其特征在于，在所述待染色濾后精液中加入抗生素溶液后再加入熒光染料，混勻后得到所述初染精液的步驟中；

所述熒光染料包括：Hoechst33342。

8.根據權利要求3所述的性控精液的分離方法，其特征在于，在所述初染精液中加入所述預熱后的Staining?Talp液后混勻，孵育40分鐘-50分鐘，得到孵育后的精液的步驟，具體包括：

在所述初染精液中加入所述預熱后的Staining?Talp液后混勻，在32℃-36℃的水浴鍋中，暗室孵育40分鐘-50分鐘，得到所述孵育后的精液。

9.根據權利要求3所述的性控精液的分離方法，其特征在于，在所述孵育后的精液中加入所述預熱后的4%Egg?yolk?Talp液，搖勻后得到所述染色精液的步驟，具體包括：

在所述孵育后的精液中加入所述預熱后的4%Egg?yolk?Talp液后通過40微米-60微米過濾器進行第二次過濾，得到所述染色精液。

10.根據權利要求5所述的性控精液的分離方法，其特征在于，在由林肯霉素和壯觀霉素配成的所述林肯-壯觀溶液中：

所述林肯霉素與所述壯觀霉素的濃度比為1:2。