[發明專利]一種胰島素結晶或胰島素類似物結晶的純化方法

有效

• 申請號: 201310455305.7
• 申請日: 2013-09-29
• 公開（公告）號: CN103709244A
• 公開（公告）日: 2014-04-09
• 發明（設計）人: 林小鵲;章琛;陳小鋒
• 申請（專利權）人: 宜昌長江藥業有限公司
• 主分類號: C07K14/62
• 分類號: C07K14/62;C07K1/14
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 趙青朵;馮瓊

本申請要求于2012年9月29日提交中國專利局、申請號為201210380407.2、發明名稱為“一種胰島素結晶及或胰島素其類似物結晶的純化方法”的中國專利申請的優先權，其全部內容通過引用結合在本申請中。

技術領域

本發明屬于藥物化學領域，涉及一種胰島素結晶或胰島素類似物結晶的純化方法。

背景技術

胰島素是由胰島β細胞受內源性或外源性物質如葡萄糖、乳糖、核糖、精氨酸、胰高血糖素等的刺激而分泌的一種蛋白質激素，胰島素是機體內唯一降低血糖的激素，同時促進糖原、脂肪、蛋白質合成。胰島素于1921年由加拿大人F.G.班廷和C.H.貝斯特首先發現。1922年開始用于臨床，使過去不治的糖尿病患者得到挽救。目前臨床應用的胰島素主要都是從豬、牛胰臟中提取的。但由于胰島素治療尚有局限性，一種新型胰島素-胰島素類似物應運而生。胰島素類似物指既可模擬正常胰島素的分泌，同時在結構上與胰島素也相似的物質，較傳統人胰島素更適合人體生理需要。目前胰島素類似物主要包括甘精胰島素、地特胰島素、賴脯胰島素、門冬胰島素和德谷胰島素。

在胰島素及其類似物的制備過程中一般都要進行結晶步驟，由于結晶后的胰島素及其類似物方便保存，因此結晶是現有胰島素及其類似物的制備工藝中必不可少的一個環節。然而目前胰島素及其類似物的結晶過程中大多均需添加酚類衍生物等有機溶劑，這些揮發性差且毒性高的有機溶劑的殘留會嚴重影響胰島素產品的質量。例如苯酚是一種有毒溶劑，揮發性較差，有強腐蝕性，對皮膚、粘膜有強烈的腐蝕作用，同時還會抑制中樞神經系統或損害肝、腎功能。在對目前的胰島素類似物-甘精胰島素在中國的兩種上市產品進行苯酚分析，均發現有一定含量的苯酚。胰島素及胰島素類似物市場巨大，目前未有胰島素晶體或胰島素類似物結晶體雜質去除方面的文獻報導，因此如何除去胰島素結晶或胰島素類似物結晶中殘留的揮發性差且毒性高的有機溶劑，提高胰島素及胰島素類似物藥品的品質是當今技術面臨的一大難題。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的是針對現有技術中的問題，提供一種胰島素結晶或胰島素類似物結晶的純化方法，純化后的胰島素結晶或胰島素類似物晶體純度高，溶劑殘留低。

為實現本發明的目的，本發明采用如下技術方案：

一種胰島素結晶或胰島素類似物結晶的純化方法，包括：

步驟1、取待純化的胰島素結晶或胰島素類似物結晶，加入有機溶劑沖洗晶體，攪拌至完全分散后抽濾，收集所得晶體。

步驟2、收集步驟1所得晶體，用有機溶劑淋洗，淋洗結束后完全抽干，進一步干燥即得；

其中，所述待純化的胰島素結晶或胰島素類似物結晶含有酚類衍生物；所述有機溶劑為乙醇、乙腈、正丙醇、正丁醇、異丙醇、丙酮中的一種或幾種，或乙醇、乙腈、正丙醇、正丁醇、異丙醇、丙酮中的一種或幾種與水的混合物，且混合物中水的含量小于50v/v%；所述沖洗晶體與淋洗晶體的時間之和≤120min。

胰島素及其類似物屬于蛋白質激素，而蛋白類的樣品不同于一般化學樣品，由于蛋白質具有一定的空間結構，強酸、強堿、重金屬鹽、尿素、胍、去污劑、三氯乙酸、有機溶劑、高溫、射線、超聲波、劇烈振蕩或攪拌等因素都易使蛋白質發生變性，因此采用常用的去雜方式無法在去除胰島素結晶或胰島素類似物結晶中揮發性差且毒性高的有機溶劑的同時保證胰島素結晶或胰島素類似物結晶的蛋白活性。

本發明采用易揮發低毒性的有機溶劑沖洗待純化的胰島素結晶或胰島素類似物結晶以除去結晶中殘留的大量的揮發性差且毒性相對較高的酚類衍生物等有機溶劑雜質，進一步用易揮發低毒性的有機溶劑淋洗胰島素結晶或胰島素類似物結晶，以徹底除去結晶中殘留的微量的揮發性差且毒性高的有機溶劑，淋洗結束后完全抽干胰島素結晶或胰島素類似物結晶然后通過干燥徹底地去除沖洗加淋洗引入的揮發性好的有機溶劑，從而解決結晶中不易揮發的有機溶劑殘留的問題。本發明所述純化方法整個過程均在常溫或低溫下操作，并且用有機溶劑沖洗加淋洗胰島素結晶或胰島素類似物結晶的時間較短，最后通過干燥將易揮發有機溶劑去除，整過程可以有效防止蛋白變性。通過本發明得到的胰島素結晶或胰島素類似物結晶終產品相比于未處理過的結晶純度高，溶劑殘留更低，而且顆粒更加均一，分散性更好，便于保存和分裝。

作為優選，步驟2所述淋洗晶體為用有機溶劑分次沖洗步驟1所得晶體。所述分次具體為至少兩次以上，可以為三次、四次。在每次沖洗晶體的有機溶劑足量的前提下，沖洗的次數越多，結晶中殘留的揮發性差且毒性高的有機溶劑去除的越徹底。