[發(fā)明專利]新型超靈敏性ELISA方法的建立

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310455146.0
• 申請(qǐng)日: 2013-09-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103513027A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-01-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 高峰;姜春來(lái);范培虎;孔維
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 長(zhǎng)春百克生物科技股份公司
• 主分類號(hào): G01N33/543
• 分類號(hào): G01N33/543;G01N21/64
• 代理公司: 北京北翔知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11285
• 代理人: 張廣育;姜建成

1.一種酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)方法，其特征在于，使用核酸酶作為標(biāo)記酶，使用由通過(guò)核酸分子連接的熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán)組成的核酸分子水解熒光底物作為所述酶的底物，并使用可檢測(cè)熒光的儀器檢測(cè)所述酶催化所述底物產(chǎn)生的熒光來(lái)測(cè)量待測(cè)樣品中目標(biāo)物的水平。

2.權(quán)利要求1的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)方法，包括以下步驟：

（a）使待測(cè)樣品與固定化至固體支持物上的捕捉試劑接觸并一起孵育，然后除去所述待測(cè)樣品，其中所述待測(cè)樣品中的目標(biāo)物被所述捕捉試劑捕獲形成目標(biāo)物-捕捉試劑復(fù)合物；

（b）將連接有核酸酶的結(jié)合試劑加入到所述固體支持物中并孵育，然后除去所述結(jié)合試劑，其中所述結(jié)合試劑與步驟（a）中形成的目標(biāo)物-捕捉試劑復(fù)合物相結(jié)合；

（c）將核酸分子水解熒光底物加入到所述固體支持物中并孵育；

（d）使用可檢測(cè)熒光的儀器檢測(cè)熒光來(lái)測(cè)量待測(cè)樣品中目標(biāo)物的水平。

3.權(quán)利要求2的方法，其中，所述核酸酶與所述結(jié)合試劑通過(guò)生物素-親和素放大系統(tǒng)相連接。

4.權(quán)利要求3的方法，其中，所述核酸酶和結(jié)合試劑分別與生物素相連，它們通過(guò)偶聯(lián)有鏈霉親和素的金納米顆粒連接。

5.權(quán)利要求2的方法，其中，所述捕捉試劑是抗原，所述結(jié)合試劑是抗體；或者所述捕捉試劑是抗體，所述結(jié)合試劑是抗原。

6.權(quán)利要求1-5之一的方法，其中，所述熒光基團(tuán)為JOE、FAM或TET，所述淬滅基團(tuán)為IAbFQ、BHQ1或TAMRA。

7.權(quán)利要求6的方法，其中，所述熒光基團(tuán)為JOE，所述淬滅基團(tuán)為IAbFQ。

8.權(quán)利要求1-5之一的方法，其中，所述核酸酶為TurboNuclease核酸酶。

9.權(quán)利要求8的方法，其中，所述核酸分子的長(zhǎng)度為2bp以上，最大為50bp。

10.權(quán)利要求9的方法，其中，所述核酸分子的長(zhǎng)度為30bp。