[發明專利]去除鄰硝基苯甲酸的酶制劑及應用

有效

• 申請號: 201310454382.0
• 申請日: 2013-09-27
• 公開（公告）號: CN103497938A
• 公開（公告）日: 2014-01-08
• 發明（設計）人: 虞方伯;管莉菠;駱林平;單勝道
• 申請（專利權）人: 浙江農林大學
• 主分類號: C12N9/04
• 分類號: C12N9/04;B09C1/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種去除鄰硝基苯甲酸的酶制劑，其特征在于：所述的酶制劑為水溶液或緩沖溶液，包含一種鄰硝基苯甲酸降解酶，其氨基酸序列如SEQ?ID?No.1所示，以及終濃度為0.1-0.3mM的MnCl₂，反應體系pH值為6.0-8.0。

2.根據權利要求1所述的酶制劑，其特征在于：所述的鄰硝基苯甲酸降解酶的純酶含量為0.03-0.1mg／mL。

3.根據權利要求1所述的酶制劑，其特征在于：所述的MnCl₂終濃度為0.2mM。

4.一種去除鄰硝基苯甲酸的酶制劑的制備方法，其特征在于：取純化酶液樣本20mL和氯化錳，用pH值7.5的50mM磷酸鈉緩沖液定容至1L制成酶制劑，酶制劑中氯化錳的終濃度為0.1-0.3mM。

5.權利要求1所述的酶制劑的制備方法，其特征在于：所述純化酶液樣本的制備方法如下：挑取含有重組質粒的菌株，該重組質粒上含有nbaB基因編碼片段，用LB培養基于37℃培養，待A_600nm值為0.6時，加入IPTG至終濃度1mM，隨后于20℃過夜表達，離心收集細胞，重懸于50mM?pH7.5的磷酸鈉緩沖液，在冰水浴中超聲破碎細胞——功率為400W超聲波破碎5s，暫停15s，共進行60個循環；隨后，于4℃，10000g離心30min去除細胞碎片，上清液即為粗酶提取液；使用一站式組氨酸標簽蛋白純化試劑盒對上述粗酶提取液進行純化，獲得純化酶液樣本。

6.權利要求1所述的酶制劑在降解土壤中鄰硝基苯甲酸中的應用。

7.如權利要求6所述的應用，其特征在于：應用權利要求1所述酶制劑降解土壤中鄰硝基苯甲酸時，體系溫度為18-36℃，pH為6.0-8.5。