[發明專利]山杏α-葡萄糖苷酶抑制肽及其制備方法和用途

有效

• 申請號: 201310454296.X
• 申請日: 2013-09-29
• 公開（公告）號: CN103539831A
• 公開（公告）日: 2014-01-29
• 發明（設計）人: 王建中;顧欣;王豐俊;崔潔;黃昆;王文江
• 申請（專利權）人: 北京林業大學
• 主分類號: C07K5/062
• 分類號: C07K5/062;C07K5/078;C12P21/06;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/20;C07K1/16;C07K1/30;A61K38/05;A61P3/10;A23L1/29
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 李志東

1.一種山杏α-葡萄糖苷酶抑制肽，其具有SEQ?ID?NO：1所示的氨基酸序列。

2.一種制備權利要求1所述的山杏α-葡萄糖苷酶抑制肽的方法，其特征在于，包括：

利用等電點沉淀法從脫脂山杏仁粕粉中提取蛋白質；

利用堿性蛋白酶對所述蛋白質進行水解，以便獲得水解產物；以及

對所述水解產物依次進行超濾處理、凝膠色譜處理、第一反相高效液相色譜處理和第二反相高效液相色譜處理，以便獲得所述山杏α-葡萄糖苷酶抑制肽。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，利用等電點沉淀法從脫脂山杏仁粕粉中提取蛋白質包括：

將所述脫脂山杏仁粕粉與水按照重量比1g：14ml的比例進行混合，并使所得混合物在pH9.0、溫度37攝氏度的條件下進行水解60min，以便獲得堿提產物；

將所述堿提產物進行第一離心，并收集第一離心上清液；

將所述第一離心上清液在等電點pH4.1條件下進行酸沉，以便獲得酸沉產物；

將所述酸沉產物進行第二離心，并收集第二離心沉淀物；以及

將所述第二離心沉淀物進行水洗至中性，以便獲得所述蛋白質。

4.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，利用等電點沉淀法從脫脂山杏仁粕粉中提取蛋白質進一步包括將所述蛋白質進行真空冷凍干燥。

5.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述堿性蛋白酶為Alcalase，利用堿性蛋白酶Alcalase對所述蛋白質進行水解的料液比為50g/L，加酶量為2%（m/m），pH值為9.0，水解溫度為50℃，水解時間為6h。

6.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，對所述水解產物依次進行超濾處理、凝膠色譜處理、第一反相高效液相色譜處理和第二反相高效液相色譜處理包括：

利用截留分子量為5000的超濾膜對所述水解產物進行超濾處理，以便得到濾液；

將所述濾液進行凝膠色譜處理并對所得到的各組分進行α-葡萄糖苷酶抑制活性檢測，以便將α-葡萄糖苷酶抑制活性最高的組分作為凝膠色譜產物；

將所述凝膠色譜產物進行第一反相高效液相色譜處理并對所得到的各組分進行α-葡萄糖苷酶抑制活性檢測，以便將α-葡萄糖苷酶抑制活性較高的組分作為第一反相高效液相色譜處理產物；以及

將所述第一反相高效液相色譜處理產物進行第二反相高效液相色譜處理，以便對所述第一反相高效液相色譜處理產物進行純化，獲得所述山杏α-葡萄糖苷酶抑制肽。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述凝膠色譜處理采用Sephadex?G-25Medium柱，流動相為10mM?pH7.0的Tris-HCl，流速為1ml/min。

8.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述第一反相高效液相色譜處理和所述第二反相高效液相色譜處理均采用Zorbax?SB-C18柱，流動相A為0.06%TFA的水，流動相B為0.05%TFA的乙腈，流速為0.8ml/min。

9.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，進一步包括對所述山杏α-葡萄糖苷酶抑制肽，依次進行質譜分析和氨基酸序列測定。

10.權利要求1所述的山杏α-葡萄糖苷酶抑制肽在制備藥物或功能食品中的用途，所述藥物或功能食品用于降血糖。