[發明專利]具有抑制呼吸道病毒感染的活性的肽及其應用和制備方法

有效

• 申請號: 201310451941.2
• 申請日: 2013-09-27
• 公開（公告）號: CN103554244A
• 公開（公告）日: 2014-02-05
• 發明（設計）人: 鄭伯建;趙旵軍
• 申請（專利權）人: 香雪集團(香港)有限公司
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;A61K38/17;A61P31/14;A61P31/16;C12N15/12;C12N15/70;C12N1/21;C12Q1/70;C12Q1/02;C12R1/93
• 代理公司: 北京天昊聯合知識產權代理有限公司 11112
• 代理人: 丁業平;金小芳

技術領域

本發明涉及抗病毒預防和治療領域。具體而言，本發明涉及具有抑制呼吸道病毒感染的活性的肽，應用該肽來阻斷呼吸道病毒感染靶細胞的方法，應用該肽來制備預防或治療呼吸道病毒感染用的藥物，以及該肽的制備方法，包含該肽的組合物，分離的編碼該肽的DNA，含有與啟動子有效連接的該DNA的表達載體，以及含有該表達載體的宿主細胞，用于篩選能夠抑制呼吸道病毒感染的肽的試劑盒及篩選方法。

背景技術

抗菌肽（AMP）是宿主自身固有的防衛分子，幾乎所有的多細胞植物和動物都會產生抗菌肽（參見文獻“Zasloff,M.Antimicrobial?peptides?of?multicellular?organisms.Nature415,389-395(2002)”）。它們構成先天免疫系統的第一道防線，能夠在感染早期階段迅速清除侵入的病原體，并且還能夠促進全身獲得性免疫應答（systemic?adaptive?immune?response）（參見文獻“Rohrl,J.,Huber,B.,Koehl,G.E.,Geissler,E.K.&Hehlgans,T.Mouse?beta-defensin14(Defb14)promotes?tumor?growth?by?inducing?angiogenesis?in?a?CCR6-dependent?manner.J?Immunol?188,4931-4939(2012)”和“Yang,D.,et?al.Beta-defensins:linking?innate?and?adaptive?immunity?through?dendritic?and?T?cell?CCR6.Science286,525-528(1999)”）。大多數AMP為兩親性的陽離子分子，這使得其具有能夠與通常帶負電荷的微生物細胞膜相結合的能力。目前已經確認了幾百種AMP，并且已經根據它們的結構特征和/或氨基酸組成進行了分類。組織蛋白酶抑制素(cathelicidin)和防衛素(defensin，也稱為防御素)是脊椎動物中的兩個AMP家族，為主要由白細胞和上皮細胞產生的小分子（參見文獻“Lehrer,R.I.Primate?defensins.Nat?RevMicrobiol2,727-738(2004)”和“Selsted,M.E.&Ouellette,A.J.Mammalian?defensins?in?the?antimicrobial?immune?response.Nat?Immunol?6,551-557(2005)”）。組織蛋白酶抑制素的前體包含保守的氨基末端“cathelin（其名稱源自組織蛋白酶L抑制劑（Cathepsin?L?inhibitor））”結構域（長度為約100個氨基酸殘基）。經過處理的組織蛋白酶抑制素肽的長度范圍為12至80個氨基酸殘基，其具有或沒有α-螺旋、β-折疊或其它類型的三級結構（參見文獻“Lehrer,R.I.&Ganz,T.Cathelicidins:a?family?of?endogenous?antimicrobial?peptides.Curr?Opin?Hematol9,18-22(2002)”和“Zanetti,M.Cathelicidins,multifunctional?peptides?of?the?innate?immunity.J?Leukoc?Biol75,39-48(2004)”）。防衛素為小的（2-6kD）富含半胱氨酸的AMP，其主要形成β-折疊結構，并通過三個（極少數為四個）保守的分子內二硫鍵而得以穩定。就脊椎動物而言，根據防衛素的二硫鍵的模式（disulfide?pattern），將防衛素進一步分為α-防衛素、β-防衛素和θ-防衛素三個亞家族（參見文獻“Lehrer,R.I.Primate?defensins.Nat?Rev?Microbiol2,727-738(2004)”）。這些肽通常具有抗微生物（包括革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌、真菌和病毒）感染的廣譜的非特異性活性。AMP抵抗細菌的各種作用模式包括：破壞細胞膜完整性（參見文獻“Shai,Y.Mechanism?of?the?binding,insertion?and?destabilization?of?phospholipid?bilayer?membranes?by?alpha-helical?antimicrobial?and?cell?non-selective?membrane-lytic?peptides.Biochim?Biophys?Acta1462,55-70(1999)”和“Yang,L.,Weiss,T.M.,Lehrer,R.I.&Huang,H.W.Crystallization?of?antimicrobial?pores?in?membranes:magainin?and?protegrin.Biophys?J79,2002-2009(2000)”）、削弱細胞核和蛋白質的合成、抑制蛋白質折疊、干擾細胞壁生物合成途徑及膜的生物靶向作用（參見文獻“Brogden,K.A.Antimicrobial?peptides:pore?formers?or?metabolic?inhibitors?in?bacteria?Nat?Rev?Microbiol3,238-250(2005)”、“Hale,J.D.&Hancock,R.E.Alternative?mechanisms?of?action?of?cationic?antimicrobial?peptides?on?bacteria.Expert?Rev?Anti?Infect?Ther5,951-959(2007)”和“Srinivas,N.,et?al.Peptidomimetic?antibiotics?target?outer-membrane?biogenesis?in?Pseudomonas?aeruginosa.Science327,1010-1013(2010)”）。然而，到目前為止，AMP的抗病毒機制仍然在很大程度上尚未被人們所了解。