[發(fā)明專利]檢測MLH1基因第12外顯子突變的引物、方法和試劑盒有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201310451847.7 | 申請日： | 2013-09-27 |
| 公開（公告）號： | CN103555826A | 公開（公告）日： | 2014-02-05 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 宋坤;周曉犢;王淑一;孫翠蓮 | 申請（專利權(quán)）人： | 合肥艾迪康臨床檢驗所有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 浙江杭州金通專利事務(wù)所有限公司 33100 | 代理人： | 黎雙華 |
| 地址： | 230088 安徽省合*** | 國省代碼： | 安徽;34 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 檢測 mlh1 基因 12 外顯子 突變 引物 方法 試劑盒 | ||
1.檢測MLH1基因突變的引物，其特征在于，包括用于擴增樣本DNA中MLH1基因第12外顯子的PCR引物，其序列為：
EXON12?F：?TGTAAAACGACGGCCAGTGCTCCATTTGGGGACCTGTA
EXON12?R：?AACAGCTATGACCATGAATGGTCCTGTGGCCTTGTC。
2.如權(quán)利要求1所述的引物，其特征在于，測序的通用引物M13為：?
M13?F：TGTAAAACGACGGCCAGT
M13?R：AACAGCTATGACCATG。
3.如權(quán)利要求1所述的引物，其特征在于，所述的MLH1基因突變是MLH1基因第12外顯子1151處T→A突變。
4.檢測MLH1基因突變的方法，包括如下步驟：
?1）采集待測血液樣本，提取DNA；
?2）以步驟1中所提取的DNA為模板，利用擴增樣本DNA中MLH1基因第12外顯子的PCR引物進行touchdownPCR擴增，得到PCR擴增產(chǎn)物，所述擴增樣本DNA中MLH1基因第12外顯子的PCR引物為：
EXON12?F：?TGTAAAACGACGGCCAGTGCTCCATTTGGGGACCTGTA
EXON12?R：?AACAGCTATGACCATGAATGGTCCTGTGGCCTTGTC；
?3）對步驟2中所得PCR擴增產(chǎn)物進行測序，與MLH1基因野生序列進行比較，確定是否存在MLH1基因第12外顯子1151處的T→A突變，測序的通用引物M13?為：?
M13?F：TGTAAAACGACGGCCAGT
M13?R：AACAGCTATGACCATG。
5.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，touchdownPCR擴增反應(yīng)條件如下：步驟1：94℃，?2min；步驟2：98℃?10sec,?66℃?30sec,?68℃?40sec，共16個循環(huán)，而且每循環(huán)一次，Tm溫度會遞減0.5℃，16個循環(huán)后最終Tm為58℃；步驟3：98℃?10sec，58℃?30sec,?68℃?40sec，共20個循環(huán)；步驟4：68℃?6min；步驟5：4?℃保存。
6.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述的MLH1基因突變是MLH1基因第12外顯子1151處的T→A突變。
7.檢測MLH1基因突變的試劑盒，包括：
(i)?核酸提取試劑；
(ii)?PCR擴增反應(yīng)試劑，其包括用于擴增樣本DNA中MLH1基因第12外顯子的PCR上游引物（EXON12?F）和下游引物（EXON12?R）分別是：
EXON12?F：?TGTAAAACGACGGCCAGTGCTCCATTTGGGGACCTGTA
EXON12?R：?AACAGCTATGACCATGAATGGTCCTGTGGCCTTGTC
(iii)?DNA測序試劑，其包括用于測序的通用引物M13?為：?
M13?F：TGTAAAACGACGGCCAGT
M13?R：AACAGCTATGACCATG。
8.如權(quán)利要求7所述的試劑盒，其特征在于，所述的MLH1基因突變是MLH1基因第12外顯子1151處的T→A突變。
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