[發明專利]一種用于檢測阿特拉津的金標二抗信號放大SRP免疫傳感方法

有效

• 申請號: 201310450946.3
• 申請日: 2013-09-27
• 公開（公告）號: CN104515752B
• 公開（公告）日: 2017-07-18
• 發明（設計）人: 彭媛;高志賢;寧保安;白家磊;孫思明;柳明
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院衛生學環境醫學研究所
• 主分類號: G01N21/552
• 分類號: G01N21/552;G01N33/577;G01N33/532
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• 代理人: 暫無信息

1.一種用于檢測阿特拉津的金標二抗信號放大SRP免疫傳感方法，該方法包括：

SPR檢測平臺的構建：

(1)將潔凈的SPR芯片浸入1.0mmol/L的十一巰基烷酸溶液中，室溫過夜，將帶有羧基的SPR芯片依次用乙醇、去離子水沖洗后氮氣吹干，裝入SPR傳感器中；

(2)以pH4.5醋酸-醋酸鈉緩沖液為耦合緩沖液，在SPR傳感器反應池中加入50μL0.4mol/L EDC和50μL 0.1mol/L NHS混合液，以活化芯片表面的羧基；加入50μL耦合緩沖液稀釋的阿特拉津完全抗原溶液，之后加入1.0mol/L pH 8.5的乙醇胺溶液作為封閉液，選用0.1mol/L的鹽酸作為再生液，耦合緩沖液作為參比溶液；

以納米金標記的二抗作為SPR傳感器放大元件進行信號放大：

(3)用磷酸鹽緩沖溶液載液穩定芯片表面直到基線穩定；所述磷酸鹽緩沖溶液的組成為：pH7.0、10mmol/L PBS，0.9％NaCl，0.005％(v/v)Tween-20；

(4)取50μL 3.12μg/mL阿特拉津單抗，10μg/mL納米金標記的二抗與阿特拉津小分子混合液在芯片表面進行免疫反應10min，用載液解吸附5min，去除不牢固的非特異結合，測得該濃度阿特拉津SPR傳感響應值；最后用0.1mol/L鹽酸+0.1％SDS為再生液，120s再生兩次，去除與阿特拉津完全抗原結合的阿特拉津單克隆抗體，使阿特拉津完全抗原可用于下一次檢測；

(5)利用測得的信號與對應阿特拉津濃度繪制檢測方法標準曲線，確定該方法的最低檢出限0.72ng/mL，檢測范圍2.18-629.06ng/mL。

2.根據權利要求1所述的方法，其中，所述阿特拉津完全抗原為阿特拉津與蛋白偶聯物。

3.根據權利要求2所述的方法，其中，所述阿特拉津完全抗原為阿特拉津與OVA偶聯物。