[發明專利]一種檢測人白介素6的電致化學發光免疫傳感器及其制備方法和檢測方法

有效

• 申請號: 201310450342.9
• 申請日: 2013-09-27
• 公開（公告）號: CN103487573A
• 公開（公告）日: 2014-01-01
• 發明（設計）人: 毛昌杰;胡曉煒;石陽陽;王程;殷暢;劉蘋貞;張勝義;牛和林;宋吉明
• 申請（專利權）人: 安徽大學
• 主分類號: G01N33/531
• 分類號: G01N33/531;G01N33/53;G01N21/76
• 代理公司: 安徽省合肥新安專利代理有限責任公司 34101
• 代理人: 何梅生

1.一種檢測人白介素6的電致化學發光免疫傳感器，其特征在于：所述免疫傳感器是在玻碳電極的表面覆蓋有氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列/硒化鎘量子點復合物膜，在所述氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列/硒化鎘量子點復合物膜的表面通過1-乙基-3-（3-二甲基氨基丙基）碳二亞胺鹽酸鹽和N-羥基琥珀酰亞胺處理后固定有人白介素6抗體。

2.根據權利要求1所述的檢測人白介素6的電致化學發光免疫傳感器，其特征在于：所述氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列/硒化鎘量子點復合物膜是以苯胺和氧化石墨烯為原材料，通過原位反應得到氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列復合物，再和硒化鎘量子點混合后獲得。

3.根據權利要求1或2所述的檢測人白介素6的電致化學發光免疫傳感器的制備方法，其特征在于按如下步驟進行：

步驟一、將50ul的苯胺溶于20ml濃度為1mol/L的濃硫酸溶液中，超聲處理0.5h后獲得苯胺的硫酸溶液；向20ml濃度為0.5mg/ml的氧化石墨烯溶液中滴加所述苯胺的硫酸溶液，室溫下攪拌30min后，再加入0.1512g過硫酸銨，持續攪拌12h，然后用去離子水離心洗滌至pH為6～7，65℃下真空干燥，獲得墨綠色產物，即為氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列復合物，以去離子水為溶劑，將氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列復合物配制成濃度為0.5mg/ml的氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列復合物溶液；

步驟二、將步驟一所制得的氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列復合物溶液與以去離子水為溶劑、濃度為8.2×10^-5mol/L硒化鎘量子點溶液按體積比1:3混合，獲得氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列/硒化鎘量子點復合物溶液；

步驟三、將玻碳電極依次用中位粒徑為1.0μm、0.3μm和0.05μm的三氧化二鋁拋光粉拋光至鏡面，然后超聲清洗，并用氮氣吹干，得備用玻碳電極；

步驟四、在步驟三制得的備用玻碳電極上滴加10μl步驟二所制得的氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列/硒化鎘量子點復合物溶液，室溫晾干后在備用玻碳電極上形成氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列/硒化鎘量子點復合物膜，再滴加10μl由20-30mg/ml1-乙基-3-（3-二甲基氨基丙基）碳二亞胺鹽酸鹽和10-20mg/ml?N-羥基琥珀酰亞胺組成的混合溶液于所述氧化石墨烯納米片/聚苯胺納米線陣列/硒化鎘量子點復合物膜的表面，靜置20-30min，得中間樣；

步驟五、將步驟四所制得的中間樣浸入以濃度為10mmol/ml的pH7.4磷酸鹽緩沖液為溶劑、濃度為0.1mg/ml的人白介素6抗體的溶液中反應12-20小時，取出后用濃度為10mmol/ml的pH7.4磷酸鹽緩沖液清洗，再浸入質量濃度為2-3%的牛血清蛋白中封閉1-2小時，取出清洗即得檢測人白介素6的電致化學發光免疫傳感器。

4.一種利用權利要求3所述檢測人白介素6的電致化學發光免疫傳感器的檢測方法，其特征是按如下步驟獲得待測人白介素6樣品濃度：

步驟a、將所述檢測人白介素6的電致化學發光免疫傳感器浸入10ul待測人白介素6樣品中，并在37℃下溫育50分鐘后取出清洗，得待測免疫傳感器；

步驟b、將步驟a所得的待測免疫傳感器在含有0.1mol/L?K₂S₂O₈和0.1mol/L?KCl的0.1mol/L的pH7.4磷酸鹽緩沖液中進行電致化學發光的測試，獲得發光強度，利用發光強度與待測人白介素6樣品濃度的標準關系曲線，判斷待測人白介素6樣品的濃度。

5.根據權利要求4所述的檢測方法，其特征是：所述標準關系曲線是通過對以濃度分別為0.0005ng/ml、0.01ng/ml、0.1ng/ml、1ng/ml和10ng/ml的人白介素6樣品所制備的待測免疫傳感器進行電致化學發光的測試，獲得各濃度人白介素6樣品所對應的發光強度，然后以人白介素6樣品的濃度的對數值為橫坐標、以發光強度為縱坐標進行擬合。