[發(fā)明專利]檢測CYP4V2基因常見突變的試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310450222.9
• 申請日: 2013-09-27
• 公開（公告）號: CN103468820A
• 公開（公告）日: 2013-12-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 郭洪;孟曉紅;白云
• 申請（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京元本知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所 11308
• 代理人: 周維鋒

1.用于檢測CYP4V2基因突變的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括用于擴(kuò)增樣本DNA的PCR反應(yīng)試劑，所述PCR反應(yīng)試劑包括用于檢測c.802-8_810del17insGC突變位點的特異性擴(kuò)增引物I，所述特異性擴(kuò)增引物I的上游引物序列如SEQ?ID?NO：4所示，所述特異性擴(kuò)增引物I的下游引物序列如SEQ?ID?NO：5所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述PCR反應(yīng)試劑還包括用于檢測c.992A>C突變位點的特異性擴(kuò)增引物Ⅱ，所述特異性擴(kuò)增引物Ⅱ的上游引物序列如SEQ?ID?NO：6所示，所述特異性擴(kuò)增引物Ⅱ的下游引物序列如SEQ?ID?NO：7所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于，所述PCR反應(yīng)試劑還包括用于檢測c.1091-2A>G突變位點的特異性擴(kuò)增引物Ⅲ，所述特異性擴(kuò)增引物Ⅲ的上游引物序列如SEQ?ID?NO：8所示，所述特異性擴(kuò)增引物Ⅲ的下游引物序列如SEQ?ID?NO：9所示。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括酶切反應(yīng)的試劑，所述酶切反應(yīng)的試劑包括限制性內(nèi)切酶，所述c.802-8_810del17insGC突變對應(yīng)的限制性內(nèi)切酶為CdiI，所述c.992A>C突變對應(yīng)的限制性內(nèi)切酶為ApaI，所述c.1091-2A>G突變對應(yīng)的限制性內(nèi)切酶為CdiI。

5.權(quán)利要求4所述的試劑盒用于檢測CYP4V2基因突變的方法，所述的方法為非診斷和治療目的的方法，其特征在于，包括如下進(jìn)行的步驟：

a取待檢測的樣本，提取全基因組DNA；

b以步驟a中的全基因組DNA為模板，加入所述PCR反應(yīng)試劑，進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)，得到PCR擴(kuò)增反應(yīng)產(chǎn)物；

c將步驟b中所得到的PCR擴(kuò)增反應(yīng)產(chǎn)物用所述酶切反應(yīng)的試劑進(jìn)行酶切反應(yīng),得到酶切產(chǎn)物；

d根據(jù)步驟c所得的酶切產(chǎn)物來判斷待檢測的樣本是否存在CYP4V2基因的突變。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，步驟b中，所述PCR反應(yīng)試劑中PCR引物的上游引物和下游引物的摩爾比為1:1。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，步驟b中，PCR反應(yīng)的條件為：反應(yīng)在ABI9700熱循環(huán)儀上進(jìn)行，95℃預(yù)變性5min，然后按照95℃變性30sec，55℃退火30sec，72℃延伸30sec為一個循環(huán)，進(jìn)行34個循環(huán)后，95℃變性30sec，55℃退火30sec，72℃延伸5min，反應(yīng)完畢后在4℃保存PCR產(chǎn)物。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，步驟c中，所述PCR反應(yīng)產(chǎn)物與所述酶切反應(yīng)試劑中的限制性內(nèi)切酶的比例為1ug:5U，所述酶切反應(yīng)的條件為：反應(yīng)在37℃恒溫水浴鍋中進(jìn)行，反應(yīng)時間為12h。

9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，步驟d中，對步驟c所得的酶切產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，根據(jù)電泳結(jié)果來判斷待檢測的樣本是否存在CYP4V2基因的突變。

10.權(quán)利要求1或2所述的試劑盒在用于檢測結(jié)晶樣視網(wǎng)膜色素變性疾病中的應(yīng)用。