[發明專利]檢測CYP4V2基因常見突變的試劑盒

有效

• 申請號: 201310450222.9
• 申請日: 2013-09-27
• 公開（公告）號: CN103468820A
• 公開（公告）日: 2013-12-25
• 發明（設計）人: 郭洪;孟曉紅;白云
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第三軍醫大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京元本知識產權代理事務所 11308
• 代理人: 周維鋒

技術領域

本發明涉及基因檢測領域，特別涉及用于檢測BCD致病基因CYP4V2基因常見突變的試劑盒及其應用。

背景技術

結晶樣視網膜色素變性（Bietti?crystalline?corneoretinal?dystrophy，BCD）是一種以眼底散在分布結晶樣小閃光點為特征的視網膜退行性改變，同時可有脈絡膜血管硬化，進行性夜盲和視野縮小。結晶樣視網膜色素變性（crystalline?retinal?degeneration)于1937年由Bietti首先報道，又名Bietti結晶樣營養障礙（Bietti's?crystalline?dystrophy)。BCD的發病年齡一般在20～40歲，雙眼病變大致對稱，并同步發展，之后進行性視力喪失，部分患者50～60歲時可出現全盲。該病在我國和日本較多見，在歐美國家較少見，男性稍多于女性，男女之比約為4：3。

BCD是一種常染色體隱性遺傳性疾病，其致病基因為CYP4V2，CYP4V2基因的純合突變或雙雜和突變會導致發病，而只有一個等位基因突變則是BCD的健康攜帶者，在我國漢族人群中CYP4V2基因致病突變的頻率約為7/1000，群體患病率約為1/24000。

視力對人類的正常生產社會活動非常重要，目前我國盲人多達500多萬，給經濟社會造成了嚴重的負擔。BCD是一種危害較大的致盲性疾病，發病年齡一般在20～40歲，因此BCD患者有較長的“窗口期”，因此對“窗口期”BCD患者的早期診斷和早期干預有重要意義。BCD是一種常染色體隱性遺傳性疾病，一個等位基因突變雖是BCD的健康攜帶者，但兩個攜帶者的婚配會使其子代BCD患病風險高達25%，因此，對CYP4V2基因致病突變攜帶者的篩查也顯得非常重要。

基因診斷作為一種新型的診斷技術，具有敏感性好、特異性高等特點，在疾病尤其是遺傳性疾病中的應用越來越廣泛。新生兒視力基因篩查技術在世界各國廣泛開展，通過此篩查可以早期發現新生兒期視力損害并進行早期干預，以避免新生患兒由于遺傳病帶來的視力障礙。BCD在歐美國家較少見，而多見于中國和日本，目前尚缺乏產業化、規范化的胎兒或新生兒BCD基因篩查技術，難以對BCD患兒做到早期診斷。BCD的致病基因為CYP4V2，定位于第4號染色體長臂，CYP4V2基因全長19kp，包含12個外顯子，編碼產物為525個氨基酸的蛋白質，該蛋白屬于CYP450家族，在脂肪酸代謝中發揮重要作用。CYP4V2基因突變形式不一，特點各異。BCD致病基因CYP4V2高頻突變的檢測從原理上可對存在BCD發病風險的患者進行早期預警，結合其他眼科檢查可以達到早期檢測、治療的目的。

發明內容

本發明的發明人通過110例BCD患者樣本的研究，發現在中國漢族人群中，CYP4V2基因的眾多致病突變中c.802-8_810del17insGC，c.992A>C和c.1091-2A>G三個突變最為常見，其中，所述的c.802-8_810del17insGC突變表示第6內含子末尾的8個核苷酸TCATACAG和第7外顯子開始的9個核苷酸GTCATCGCT缺失并在缺失的位置插入兩個個核苷酸GC，從而導致第7外顯子缺失。所述的c.992A>C突變表示CYP4V2基因在第8外顯子中的第992位編碼堿基由A突變為C，從而導致其第331位編碼氨基酸由組氨酸突變為脯氨酸。所述的c.1091-2A>G突變表示CYP4V2基因第8內含子倒數第2個堿基由A突變為G，引起剪切受體AG變為GG，從而導致第9外顯子缺失。對BCD患者的突變篩查結合其它地區的統計資料顯示，這三個突變的發生頻率約為76%，是目前所發現的最常見的BCD突變位點；并且通過研究證明，CYP4V2基因三個高頻排他性突變c.802-8_810del17insGC，c.992A>C和c.1091-2A>G與BCD密切相關，是中國BCD人群的重要高頻突變，占總數的76%，可以作為早期分子標記來進行BCD的風險評估和基因預警。

有鑒于此，本發明提供了用于檢測BCD致病基因CYP4V2基因的三個高頻突變c.802-8_810del17insGC，c.992A>C和c.1091-2A>G的試劑盒，其檢測結果特異性高，操作簡單。

為實現上述目的，本發明的技術方案為：