[發明專利]含BMP-2和ZsGreen1基因的表達載體及其構建方法無效
| 申請號： | 201310446813.9 | 申請日： | 2013-09-26 |
| 公開（公告）號： | CN103525851A | 公開（公告）日： | 2014-01-22 |
| 發明（設計）人： | 岳建輝;趙曉麗;潘浩波;胡慶茂 | 申請（專利權）人： | 深圳先進技術研究院 |
| 主分類號： | C12N15/66 | 分類號： | C12N15/66;C12N15/85 |
| 代理公司： | 深圳中一專利商標事務所 44237 | 代理人： | 張全文 |
| 地址： | 518055 廣東省深圳*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | bmp zsgreen1 基因 表達 載體 及其 構建 方法 | ||
1.一種含BMP-2和ZsGreenl基因的表達載體構建方法，包括:
SO1.通過PCR方法將BMP-2基因擴增，得擴增產物;
S02.將所述擴增產物和pIRES2-ZsGreenl載體分別利用XhoI和BamHI酶進行雙酶切處理，將所得含BMP-2基因的雙酶切產物和含ZsGreenl基因的雙酶切產物進行粘性末端連接，
其中所述通過PCR方法將BMP-2基因擴增時使用的引物對為:SEQ?ID?NO:l和SEQ?ID?NO:2。
2.如權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述BMP-2基因包括信號肽、前肽和成熟肽序列。
3.如權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述粘性末端連接使用E.coli?DNA連接酶或T4?DNA連接酶進行。
4.如權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述PCR方法的反應條件為:
94-95℃預變性2-3分鐘，
97-98℃變性10-12秒，55-56℃退火30-40秒，68-70℃延伸90-120秒，擴增25-30個循環，
70-72℃延伸10-12分鐘。
5.如權利要求1所述的構建方法，其特征在于，在所述通過PCR方法將BMP-2基因擴增之后還包括對目的DNA序列進行純化回收的操作。
6.如權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述粘性末端連接過程中，所述含BMP-2目的基因的雙酶切產物與含ZsGreenl基因的雙酶切產物的DNA摩爾含量比為3-6:1。
7.如權利要求1-6中任一項所述的構建方法制備的含BMP-2和ZsGreenl基因的表達載體。
8.如權利要求7所述的表達載體用于誘導成骨細胞分化的應用，所述應用包括將所述表達載體轉染至骨髓間充質干細胞中的步驟。
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