[發(fā)明專利]一種快速鑒定甘薯莖腐病抗性的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310446213.2
• 申請日: 2013-09-26
• 公開（公告）號: CN103555813A
• 公開（公告）日: 2014-02-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃立飛;房伯平;陳景益;張雄堅(jiān);李育軍;王章英;羅忠霞;黃實(shí)輝;陳新亮
• 申請（專利權(quán)）人: 廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物研究所
• 主分類號: C12Q1/18
• 分類號: C12Q1/18;C12R1/645
• 代理公司: 廣州市越秀區(qū)哲力專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 44288
• 代理人: 李悅;齊文劍

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及對甘薯莖腐病的抗病性進(jìn)行快速鑒定的方法，尤其是對甘薯抗莖腐病種質(zhì)資源和育種材料的篩選方法，屬于植物保護(hù)技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

甘薯（Ipomoea?batatas（L.）Lam）是世界糧食、能源和工業(yè)原料作物之一，我國是世界上最大的甘薯生產(chǎn)國家，其種植面積僅次于水稻、小麥和玉米而居第四位。近年隨著甘薯市場需求旺盛，農(nóng)民種植和引進(jìn)新品種的積極性增加，種苗或種薯在國家和地區(qū)間流動頻繁，加之無序種植，隨之而來在我國甘薯主產(chǎn)區(qū)出現(xiàn)了一些新病害或傳統(tǒng)病害重新爆發(fā)流行。

甘薯莖腐病首先在美國喬治亞州被發(fā)現(xiàn)，世界上其他國家均未見報(bào)道。2006年在我國廣東省東部地區(qū)甘薯產(chǎn)區(qū)首先發(fā)現(xiàn)此病害，為我國甘薯新病害。該病害傳播快，危害嚴(yán)重，已在廣東省的廣州、惠州、河源、湛江、增城、海豐、博羅、惠東等多個(gè)市縣爆發(fā)，病情逐年加重，可能已成為廣東省發(fā)病面積最大、危害最重的甘薯病害。發(fā)病嚴(yán)重的田塊，成晆的薯苗死亡，甚至全田的薯苗死亡，顆粒無收，嚴(yán)重影響甘薯的生產(chǎn)和薯農(nóng)的利益。甘薯莖腐病的病原菌根據(jù)新的分類系統(tǒng)屬于D．dadantii，是我國三類檢疫性有害生物之一，該病菌以種薯或種苗傳帶為主要傳播方式。目前世界上尚無針對甘薯莖腐病的有效防治方法。

眾所周知，抗病品種的使用是最為經(jīng)濟(jì)有效環(huán)保的防治方法，也是控制病害的最根本措施之一。在抗病品種的選育過程中，需要進(jìn)行大量的抗病性鑒定試驗(yàn)，而建立完善的病害抗性鑒定評價(jià)方法是進(jìn)行此項(xiàng)研究的重要前提。因此，一種操作簡單、快速準(zhǔn)確的接種鑒定方法是研究中不可或缺的。目前，植物病原細(xì)菌的接種方法較多，如剪葉法、浸（蘸）根法、針刺法、噴霧法、摩擦法、注射法、灌注土壤法等。這些方法因細(xì)菌病害和寄主不同，導(dǎo)致作用效果也不同。

甘薯莖腐病的研究首先在美國報(bào)道。Schaad（1977）等利用柯赫氏法則采用注射接種法對病原菌進(jìn)行了驗(yàn)證，確認(rèn)了病原菌為菊歐文氏菌（Schaad?N?W,and?Brenner?D.A?bacterial?wilt?and?root?rot?of?sweet?potato?caused?by?Erwinia?chrysanthemi.Phytopathology,1977,67:302-308）。Clark等（1989）利用菊歐文氏菌懸液涂于薯塊切片表面進(jìn)行接種，結(jié)果表明甘薯塊根接種病原菌6天或者更長時(shí)間后，品種間甘薯塊根抗性差異顯著；另外該接種方法與針刺接種甘薯莖枝的抗性反應(yīng)無相關(guān)性(Clark,C?A.,Wilder-Ayers,J?A.,and?Duarte,V.Resistance?of?Sweet?potato?to?Bacterial?Root?and?Stem?Rot?Caused?by?Erwinia?chrysanthemi.Plant?Disease,1989,73:984-987)。在我國甘薯莖腐病屬于新病害，對此病害的研究較少，對甘薯莖腐病抗性方法的鑒定更是沒有。發(fā)明人嘗試用美國學(xué)者在甘薯莖腐病致病性鑒定所用的針刺法和薯塊切片接菌法以及已報(bào)道諸如剪葉法、噴霧法等幾種常用細(xì)菌病害接種方法，發(fā)現(xiàn)這些接種方法得到的致病甘薯的發(fā)病癥狀不穩(wěn)定，接菌量很難保證一致，不適合用于甘薯莖腐病的大規(guī)模接種抗性鑒定。因此，建立一種操作簡單、發(fā)病迅速、效果穩(wěn)定的接種鑒定方法對抗莖腐病甘薯種質(zhì)資源和育種材料的篩選顯得尤為重要。

發(fā)明內(nèi)容

針對甘薯莖腐病抗病育種的特點(diǎn)和現(xiàn)有甘薯莖腐病抗性接種鑒定技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種快速、準(zhǔn)確、可應(yīng)用于大樣本量鑒定的甘薯莖腐病抗性鑒定方法。

為解決上述問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案如下：

一種快速鑒定甘薯莖腐病抗性的方法，包括以下步驟：

（1）莖枝的處理與預(yù)培養(yǎng)：取生長正常、整齊、無病蟲害的甘薯主莖或側(cè)枝，用無菌手術(shù)刀將甘薯主莖或側(cè)枝修剪成帶有3～4片展葉的莖枝，剪后用無菌水洗去剪口處流出的汁液；將已修剪清洗的莖枝放入滅菌廣口瓶中進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)，滅菌廣口瓶裝有占其體積1/3的蒸餾水或無菌水，室溫條件下培養(yǎng)2～3天；

（2）莖腐病病原菌菌懸液的制備：將甘薯莖腐病病原菌菌株H12接種于改良營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，于28℃劃線培養(yǎng)40～48h后，用無菌水配成濃度為1×10⁸cfu/mL的莖腐病病原菌菌懸液；