[發明專利]一種快速鑒定甘薯莖腐病抗性的方法

無效

• 申請號: 201310446213.2
• 申請日: 2013-09-26
• 公開（公告）號: CN103555813A
• 公開（公告）日: 2014-02-05
• 發明（設計）人: 黃立飛;房伯平;陳景益;張雄堅;李育軍;王章英;羅忠霞;黃實輝;陳新亮
• 申請（專利權）人: 廣東省農業科學院作物研究所
• 主分類號: C12Q1/18
• 分類號: C12Q1/18;C12R1/645
• 代理公司: 廣州市越秀區哲力專利商標事務所(普通合伙) 44288
• 代理人: 李悅;齊文劍

1.一種快速鑒定甘薯莖腐病抗性的方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）莖枝的處理與預培養：取生長正常、整齊、無病蟲害的甘薯主莖或側枝，用無菌手術刀將甘薯主莖或側枝修剪成帶有3～4片展葉的莖枝，剪后用無菌水洗去剪口處流出的汁液；將已修剪清洗的莖枝放入滅菌廣口瓶中進行預培養，滅菌廣口瓶裝有占其體積1/3的蒸餾水或無菌水，室溫條件下培養2～3天；

（2）莖腐病病原菌菌懸液的制備：將甘薯莖腐病病原菌菌株H12接種于改良營養瓊脂培養基中，于28?℃劃線培養40～48?h后，用無菌水配成濃度為1×10⁸?cfu/mL的莖腐病病原菌菌懸液；

（3）莖枝的接種培養：待莖枝長出須根后，將莖枝平置，在莖枝中間位置且兩節之間，用移液器的槍頭扎1個小洞且不穿透莖枝，然后將莖枝平置于鋪有浸透無菌水的濾紙的密閉塑料盒內，并且將扎有小洞的一側朝上，吸取15～25?μL步驟（2）制得的菌懸液，注入莖枝小洞內進行接種，以無菌水作為空白對照，接種后將塑料盒蓋好密封，置于30?℃的光照培養箱內，培養20～24?h；

（4）病害癥狀觀察與等級鑒定：培養20～24?h后，觀察病害情況，并對甘薯莖枝進行病害等級鑒定。

2.根據權利要求1所述的快速鑒定甘薯莖腐病抗性的方法，其特征在于：步驟（1）中所述莖枝是從甘薯葉節下切斷，所述莖枝的長度為12～15?cm。

3.根據權利要求1所述的快速鑒定甘薯莖腐病抗性的方法，其特征在于：所述步驟（2）中吸取20?μL步驟（2）制得的菌懸液，注入莖枝小洞內進行接種。

4.根據權利要求1所述的快速鑒定甘薯莖腐病抗性的方法，其特征在于：所述步驟（2）中莖枝接種后置于30?℃的光照培養箱內，培養24?h。

5.根據權利要求1所述的快速鑒定甘薯莖腐病抗性的方法，其特征在于：所述改良營養瓊脂培養基的組成包括蛋白胨5?g/L，蔗糖10?g/L，牛肉膏3?g/L，酵母浸膏1g/L和瓊脂15?g/L，所述改良營養瓊脂培養基的pH值為7.0～7.2。

6.根據權利要求1所述的快速鑒定甘薯莖腐病抗性的方法，其特征在于：步驟（4）中將甘薯的發病程度分為1～5級，其中1—無癥狀，健康；2—小洞出現黑色腐爛，但腐爛小于1?cm；3—腐爛大于等于1?cm小于2?cm，且腐爛沒有通過任何一個葉節；4—腐爛長度大于等于2?cm小于3?cm或者腐爛通過任何一個葉節；5—腐爛長度大于3?cm或腐爛通過2個葉節；以甘薯的發病程度作為病害評價標準鑒定甘薯品種的抗病性，發病程度=5為高度感病品種，3≤發病程度﹤5為感病品種；1≤發病程度﹤3為抗病品種。