[發明專利]包含改良型人凝血因子FVII-Fc融合蛋白的藥物組合物

無效

• 申請號: 201310445877.7
• 申請日: 2013-08-16
• 公開（公告）號: CN103599527A
• 公開（公告）日: 2014-02-26
• 發明（設計）人: 李強;劉長付;馮維;武翠;孫見宇;孫乃超
• 申請（專利權）人: 安源生物科技(上海)有限公司
• 主分類號: A61K38/48
• 分類號: A61K38/48;A61K47/48;A61P7/04;C12N15/62;C12N9/50;C12N15/63;C12N5/10
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技術領域

本發明涉及一種改良型人凝血因子FVII的Fc融合蛋白及其制備方法和用途，特別是治療多種凝血相關疾病的用途。

背景技術

凝血是由多種血液組分(或因子)之間復雜的相互作用組成的逐漸導致纖維蛋白凝塊形成的過程，通常參與被稱為凝血“級聯反應”的血液組分是原酶或酶原，即不具有酶活性的蛋白，在激活劑的作用下使其轉變為活性酶。凝血因子FVII就是這些凝血因子中的一種。

FVII是一種維生素K依賴性的血漿糖蛋白，在肝臟中合成，并以分子量約為53KDa的單鏈蛋白酶原形式分泌到血液中(Broze等，J?Biol?Chem，1980，255：1242-1247)。FVII酶原在單一位點Arg152-Ile153處被蛋白酶水解，產生由一個二硫鍵連接的雙鏈，從而轉變為其活性形式FVIIa。單鏈凝血因子FVII可以通過凝血因子FXa、凝血因子FXIIa、凝血因子FIXa、凝血因子FVIIa或凝血酶在體外水解轉化為雙鏈凝血因子FVIIa?；罨腇VIIa包含NH₂-末端衍生的輕鏈(～20KDa)和COOH-末端衍生的經由單一二硫鍵(Cys135至Cys262)連接的重鏈(～30KDa)。輕鏈含有細胞膜結合性Gla結構域和兩個EGF結合結構域，而重鏈含有催化結構域。處于活化形式時，FVIIa作為絲氨酸蛋白酶，參與凝血級聯反應的外源性途徑(extrinsic?pathway)。當血管的脈管內腔受損傷時，外源性凝血路徑被啟動，細胞膜糖蛋白組織因子(Tissue?Factor，TF)被暴露，結合循環性的FVII和已存在的較小量活化FVIIa，這種結合促進FVII全部轉化為FVIIa，隨后在鈣離子和磷脂的協同作用下，使FIX轉化為FIXa，FX轉化為FXa，繼而進一步將凝血酶原轉化為凝血酶。凝血酶在血液凝固和傷口愈合方面起關鍵作用，在血管損傷的最初階段，其誘導血小板聚集并誘導纖維蛋白形成，之后刺激細胞生長從而促進受損血管的修復(Osterud等，Proc?Natl?Acad?Sci?USA，1977，74：5260-5264)。

編碼人FVII(hFVII)的基因位于13號染色體的q34-qter9，9個外顯子組成，長度為12.8Kb(O’Hara等，Proc?Natl?Acad?Sci?USA，1987，84：5158-5162)。hFVII包含四個結構域：氨基端γ-羧基谷氨酸(Gla)結構域，兩個“類表皮生長因子(EGF)”結構域和羧基端絲氨酸蛋白酶域(催化結構域)。外顯子Ia和Ib編碼信號肽序列；外顯子2編碼Gla結構域；外顯子3編碼一段短的疏水區；外顯子4和5編碼類表皮生長因子結構域；外顯子6至8編碼絲氨酸蛋白酶催化結構域(Yoshitake等，Biochemistry，1985，24：3736-3750)。成熟FVII蛋白經歷多種翻譯后修飾，包括維生素K依賴性的羧基化，導致該分子NH2-末端產生10個γ羧基化的谷氨酸殘基。其他翻譯后修飾包括羥基化(Asp63)、N-型糖基化(Asn145和Asn322)以及O-型糖基化(Ser52和Ser60)。

血友病A和B是遺傳性疾病，分別是凝血因子FVIII和凝血因子FIX的缺陷而造成的。蛋白替代療法是血友病A和B的傳統治療方法，包括靜脈內給予從人血漿中制備的或基因工程方法獲得的重組FVIII或FIX。然而，在血友病A和B的治療中，存在最嚴重的醫學問題是針對替代凝血因子的同種抗體(alloantibody)的產生，這導致治療效力降低或者使治療無效。所有血友病A患者中產生針對凝血因子FVIII抗體高達30％，而針對血友病B產生凝血因子FIX抗體發生幾率較小，但具有更嚴重的后果，因為它們對免疫耐受性誘導療法較不敏感。在血友病治療中使用FVIIa是基于FVIIa對于凝血酶活化的血小板表面的低親和性結合，通過給予藥物學劑量的外源性FVIIa，使損傷位處血小板表面上的凝血酶產生被增強，這與FVIII/FIX的存在無關，即繞開對于凝血因子VIIIa和凝血因子IXa的需求來達到止血。因此，FVIIa可用于存在有抑制物的血友病患者的出血性狀況的治療。FVIIa還被用于治療先天性FVII缺陷的患者。另外，FVIIa越來越多地被用做適應癥外使用(off-lable?use)，如治療與非血友病患者中先天性或獲得性出血性疾病，外傷或手術相關的出血。