[發明專利]以誘導獨一味種子萌發幼苗為外植體的組織培養試管苗獲得方法

有效

• 申請號: 201310436768.9
• 申請日: 2013-09-23
• 公開（公告）號: CN103444551A
• 公開（公告）日: 2013-12-18
• 發明（設計）人: 張玨;牟蘭;楊軼浠;尹歡;何詩虹;郭翠平;阮利霞
• 申請（專利權）人: 成都大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 龔燮英

1.一種以誘導獨一味種子萌發幼苗為外植體的組織培養試管苗獲得方法,其特征在于包括如下步驟：

（1）選取當年收獲健康飽滿，具有活力的獨一味種子，播種于浸有GA₃?50mg·L^-1的濾紙上進行催芽，待幼苗長至約1cm后,，噴施一次800倍液的多菌靈進行植株的表面消毒殺菌預處理，然后收集幼苗；

（2）先將作為外植體的獨一味幼苗用800倍多菌靈溶液侵泡30min，再用自來水沖洗1h左右，，放入超凈工作臺內用濃度為75%的酒精消毒10s，無菌水沖洗3次，接著用濃度為0.1%的升汞消毒5min，最后用無菌水震蕩洗4～6次，用無菌濾紙吸干幼苗表面的水分備用；

（3）在無菌條件下用手術刀在獨一味幼苗上劃出傷口，接種于愈傷組織誘導培養基:MS+6-BA?0.5mg.L-1+NAA?1.0mg·L^-1+蔗糖30g·L^-1+瓊脂4.8g·L^-1中進行愈傷組織誘導，所采用的pH值為6.0，培養溫度20℃、光照時數10h/d、光照強度為1000～1500Lx，培養時間30d；

（4）30d后，選取顏色黃綠、有瘤狀突起質地良好的愈傷組織作為外植體，接入叢生芽誘導培養基：MS+6-BA?1.0～3.0mg·+NAA?0.1～3mg·L^-1+蔗糖30g·L^-1+瓊脂4.8g·L^-1中進行叢生芽的誘導，所采用的培養基pH值為6.0，培養溫度為20℃、光照時數12h/d、光照強度為1200～1800Lx，培養35d后，愈傷組織誘導分化出大量叢生芽；

（5）根的誘導培養，待叢生芽長至2cm時，將叢生芽分成單芽，轉接到生根培養基：1/2MS+IBA?0.5mg·L^-1+NAA?0.1mg·L^-1+蔗糖15g·L^-1+瓊脂4.8g·L^-1，中誘導生根20d后,待不定根長至2-3cm時，即可移至高海拔地區溫室大棚內進行煉苗移栽。