[發(fā)明專利]重組Ⅱ型豬圓環(huán)病毒的衣殼蛋白噬菌體展示顆粒及其制備方法與應用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310432346.4
• 申請日: 2013-09-22
• 公開（公告）號: CN103540605A
• 公開（公告）日: 2014-01-29
• 發(fā)明（設計）人: 楊柳;沈克飛;鄭華;張邑帆;付利芝;谷山林;熊仲良
• 申請（專利權）人: 重慶市畜牧科學院
• 主分類號: C12N15/70
• 分類號: C12N15/70;C12N7/01;C12N15/34;C12N15/66;A61K39/12;A61P31/20;C12R1/92
• 代理公司: 北京元本知識產權代理事務所 11308
• 代理人: 秦力軍

1.重組Ⅱ型豬圓環(huán)病毒的衣殼蛋白噬菌體展示顆粒的制備方法，具體包括以下步驟：

A優(yōu)化編碼Ⅱ型豬圓環(huán)病毒的衣殼蛋白的核苷酸

以GenBank中編號為HM565924.1的衣殼蛋白的核苷酸序列作為模板，優(yōu)化后，其序列如SEQ?ID?NO:1所示，進行人工合成；

B重組質粒的構建

以人工合成的核苷酸為模板，進行PCR擴增，上游引物為如SEQ?ID?NO:2所示，下游引物如SEQ?ID?NO:3所示，循環(huán)30次，得PCR產物；將所得PCR產物純化后，經過E.coRI,HindIII雙酶切，回收酶切產物；將酶切產物與同樣經過E.coRI,HindIII雙酶切的線性表達載體pET28a（+）連接，得重組質粒；

C重組噬菌體基因組的構建

將所述的重組質粒用E.coRI,HindIII進行雙酶切，酶切產物與具有相同粘性末端的T7噬菌體載體的雙臂連接，得重組噬菌體基因組；

D重組Ⅱ型豬圓環(huán)病毒的衣殼蛋白噬菌體展示顆粒的制備

將所述重組噬菌體基因組經過體外包裝后，轉染宿主菌E.coli?BLT5403，通過培養(yǎng)裂解宿主菌，得到重組Ⅱ型豬圓環(huán)病毒的衣殼蛋白噬菌體展示顆粒。

2.根據(jù)權利要求1所述的制備方法，其特征在于：將步驟D所得重組Ⅱ型豬圓環(huán)病毒的衣殼蛋白噬菌體展示顆粒通過離心處理，得濃縮重組PCV2-Cap/Phage展示顆粒。

3.編碼Ⅱ型豬圓環(huán)病毒的衣殼蛋白的表位氨基酸的核苷酸，其特征在于：其核苷酸序列如SEQ?ID?NO:1所示。

4.一種重組質粒的制備方法，其特征在于：以如SEQ?ID?NO:1所示的DNA為模板，在擴增體系下進行PCR擴增，循環(huán)30次，得PCR產物；PCR擴增所設計并合成的上游引物為如SEQ?ID?NO:2所示，下游引物如SEQ?ID?NO:3所示；將所得PCR產物純化后，經過E.coRI,HindIII雙酶切，回收酶切產物；將酶切產物與同樣經過E.coRI,HindIII雙酶切的線性表達載體pET28a（+）連接，得重組質粒。

5.重組噬菌體基因組，其特征在于：擴增和收集權利要求4所述的重組質粒，用E.coRI,HindIII進行雙酶切，酶切產物與具有相同粘性末端的T7噬菌體載體的雙臂連接，得重組噬菌體基因組。

6.運用權利要求5所述的重組噬菌體基因組制備重組Ⅱ型豬圓環(huán)病毒的衣殼蛋白噬菌體展示顆粒的方法，其特征在于：將所述重組噬菌體基因組經過體外包裝后，轉染宿主菌E.coli?BLT5403，通過培養(yǎng)裂解宿主菌，得到重組Ⅱ型豬圓環(huán)病毒的衣殼蛋白噬菌體展示顆粒。

7.權利要求6所制備的重組Ⅱ型豬圓環(huán)病毒的衣殼蛋白噬菌體展示顆粒在制備防控Ⅱ型豬圓環(huán)病毒感染的應用。

8.權利要求6所制備的重組Ⅱ型豬圓環(huán)病毒的衣殼蛋白噬菌體展示顆粒在制備Ⅱ型豬圓環(huán)病毒抗原中的應用。

9.Ⅱ型豬圓環(huán)病毒的衣殼蛋白的表位蛋白在制備重組Ⅱ型豬圓環(huán)病毒的衣殼蛋白/噬菌體展示顆粒中的應用，其特征在于：Ⅱ型豬圓環(huán)病毒的衣殼蛋白的表位蛋白的氨基酸序列以如SEQ?ID?NO:4所示。