[發明專利]輪葉蒲桃離體培養和快速繁殖的方法

有效

• 申請號: 201310431291.5
• 申請日: 2013-09-22
• 公開（公告）號: CN103477988A
• 公開（公告）日: 2014-01-01
• 發明（設計）人: 呂秀立;練發良;張慶費;戴海英;吳曉春;王軍峰;宋艷冬;李澤建;雷珍
• 申請（專利權）人: 麗水市林業科學研究院;上海市園林科學研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.輪葉蒲桃離體培養和快速繁殖的方法，取輪葉蒲桃外植體經表面消毒、初代培養、增殖培養、壯苗培養和生根培養獲得再生試管苗，并進行栽種，其特征在于按下列步驟進行：

a、選擇生長健壯，無病蟲害輪葉蒲桃帶腋芽的枝條作為起始外植體，用洗潔精擦洗表面后，流水沖洗20分鐘，再進行消毒處理；

b、將消毒處理后的外植體接種到初代培養基上，進行初代培養；

c、將初代培養的無菌苗轉入增殖培養基，該增殖培養基為：

改良WPM+BA0.1~1.5mg·L^-1+NAA0.01~0.5mg·L^-1+蔗糖20~40g·L^-1+瓊脂4~12?g·L^-1，誘導不定芽；

d、將誘導出的叢生芽分切后，轉移至壯苗培養基，進行壯苗培養；

e、將經壯苗培養生長到2.5cm以上的試管苗分切后，轉移至生根培養基中，該生根培養基為：

1/2改良WPM+IBA0.05~1.5?mg·L^-1?+蔗糖15~35g·L^-1+瓊脂4~12g·L^-1；

f、對所得的生根試管苗進行清洗，移至珍珠巖、草炭土的混合基質中進行栽種。

2.根據權利要求1所述的輪葉蒲桃離體培養和快速繁殖的方法，其特征在于步驟a中，取輪葉蒲桃包含腋芽的枝條，切取成為長度0.5~2.5cm，腋芽位于中間的莖段，切去葉片，保留兩片葉柄基部保護腋芽生長點，進行消毒處理。

3.根據權利要求1所述的輪葉蒲桃離體培養和快速繁殖的方法，其特征在于步驟a中，所述的消毒處理的方法為：先用濃度為72%的酒精消毒30~60s，再用無菌水沖洗3~4次，然后用加有0.1~0.2%的升汞液浸泡15~30分鐘，用無菌水沖洗至無殘留，得到無菌的外植體。

4.根據權利要求1所述的輪葉蒲桃離體培養和快速繁殖的方法，其特征在于步驟b中，所述的初代培養基為：改良WPM+BA0.15~0.25mg·L^-1+NAA0.15~0.25mg·L^-1+蔗糖25~35g·L^-1+瓊脂4~12g·L^-1。

5.根據權利要求1所述的輪葉蒲桃離體培養和快速繁殖的方法，其特征在于步驟c中，所述的增殖培養基為：改良WPM+BA0.4?mg·L^-1+NAA0.1mg·L^-1+蔗糖30g·L^-1+瓊脂6?g·L^-1。

6.根據權利要求1所述的輪葉蒲桃離體培養和快速繁殖的方法，其特征在于步驟d中，所述的壯苗培養基為：改良WPM+BA0.15~0.25mg·L^-1+IBA0.15~0.25mg·L^-1+蔗糖25~35?g·L^-1+瓊脂4~12?g·L^-1。

7.根據權利要求1所述的輪葉蒲桃離體培養和快速繁殖的方法，其特征在于步驟e中，所述的生根培養基為：1/2改良WPM?+IBA?0.2?mg·L^-1+蔗糖20?g·L^-1+瓊脂6?g·L^-1。

8.根據權利要求1所述的輪葉蒲桃離體培養和快速繁殖的方法，其特征在于：所述的初代培養、增殖培養、壯苗培養和生根培養的培養條件均為無菌環境，光周期為10~15h/d，光照強度1500~2500lx，培養溫度為室溫。

9.根據權利要求1或8所述的輪葉蒲桃離體培養和快速繁殖的方法，其特征在于：所述初代培養的周期為22~28天，增殖培養的周期為28~32天，壯苗培養的周期為18~22天，生根培養的周期為28~32天。

10.根據權利要求1所述的輪葉蒲桃離體培養和快速繁殖的方法，其特征在于步驟f中，將生根試管苗置于自然環境中6~10天，取出洗凈根部，用500~600倍托布津水溶液浸泡數秒，移栽到草炭土：珍珠巖＝2:1的混合基質中，起始6~10天內保持苗的葉面濕潤并適當遮陽，其后按干透濕透的原則澆水，逐漸加強光照至全光照，進行栽種。