[發明專利]用于與EGFR基因雜交的DNA探針庫及采用其富集EGFR基因片段的方法

有效

• 申請號: 201310430173.2
• 申請日: 2013-09-18
• 公開（公告）號: CN103667270A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發明（設計）人: 邵陽
• 申請（專利權）人: 邵陽
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C40B40/06;C12N15/10;C12Q1/68
• 代理公司: 北京瑞恒信達知識產權代理事務所(普通合伙) 11382
• 代理人: 曹津燕;張偉

1.一種用于與EGFR基因雜交的DNA探針庫，其特征在于，所述DNA探針庫包括一個或多個能夠與EGFR基因雜交的DNA探針，所述DNA探針包含以下序列：

SEQ?ID?NO.1、SEQ?ID?NO.2、SEQ?ID?NO.3、SEQ?ID?NO.4、SEQ?ID?NO.5、SEQ?ID?NO.6、SEQ?ID?NO.7、SEQ?ID?NO.8、SEQ?ID?NO.9、或SEQ?ID?NO.10；

優選地，所述DNA探針的序列如以下序列所示：

SEQ?ID?NO.1、SEQ?ID?NO.2、SEQ?ID?NO.3、SEQ?ID?NO.4、SEQ?ID?NO.5、SEQ?ID?NO.6、SEQ?ID?NO.7、SEQ?ID?NO.8、SEQ?ID?NO.9、或SEQ?ID?NO.10。

2.一種富集EGFR基因片段的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

1）獲得受試者的DNA樣本庫；

2）獲得能夠與EGFR基因雜交的DNA探針庫；

3）使所述DNA探針庫與所述DNA樣本庫進行雜交；和

4）分離步驟3）的雜交產物，然后釋放經雜交富集的EGFR基因片段。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述步驟1）中的DNA樣本庫由雙鏈DNA片段組成，并且，所述步驟1）包括：

1-1）提取受試者的全基因組DNA，然后將其片段化；或者

1-2）提取受試者的mRNA，將其片段化，然后以該經片段化的mRNA為模板合成雙鏈cDNA；

其中，所述受試者為哺乳動物，優選人，且從受試者的細胞、組織或體液樣本中提取全基因組DNA或mRNA；

優選地，所述DNA片段的長度為150-600bp；

進一步優選地，所述DNA片段的長度為150-200bp。

4.根據權利要求1至3中任一項所述的方法，其特征在于，所述步驟2）中的DNA探針庫為根據權利要求1所述的DNA探針庫。

5.根據權利要求1至4中任一項所述的方法，其特征在于，所述步驟3）包括：

3-1）采用選擇性標記標記DNA探針庫中的DNA探針；和

3-2）使所述DNA探針庫與DNA樣本庫進行雜交；

優選地，所述步驟3-1）中的選擇性標記為生物素；

進一步優選地，所述步驟3-2）包括在PCR擴增儀中，在65℃下將所述DNA探針庫與DNA樣本庫孵育24小時。

6.根據權利要求1至5中任一項所述的方法，其特征在于，所述步驟4）中利用DNA探針上的選擇性標記分離雜交產物；

優選地，所述步驟3-1）中的選擇性標記為生物素，所述步驟4）中利用鏈霉親和素-生物素的親和作用分離雜交產物。

7.一種檢測EGFR基因的基因結構突變的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

1）根據權利要求1至6中任一項所述的方法富集EGFR基因片段；和

2）檢測所述EGFR基因的基因結構突變。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述步驟2）中采用下一代測序技術，通過對富集到的EGFR基因片段進行測序而檢測所述EGFR基因的結構突變。

9.一種用于富集EGFR基因片段的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包含根據權利要求1所述的DNA探針庫。