[發明專利]一種癌胚抗原磁微?；瘜W發光免疫分析檢測試劑盒及其檢測方法

有效

• 申請號: 201310428782.4
• 申請日: 2013-09-17
• 公開（公告）號: CN103472229A
• 公開（公告）日: 2013-12-25
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 武漢生之源生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/531;G01N21/76
• 代理公司: 北京華沛德權律師事務所 11302
• 代理人: 劉杰

技術領域

本發明屬于試劑盒技術領域，特別涉及一種癌胚抗原磁微粒化學發光免疫分析檢測試劑盒及其檢測方法。

背景技術

癌胚抗原（CEA）是在1965年由Gold和Freedman首先從胎兒及結腸癌組織中發現的，是一種分子量為22ku的多糖蛋白復合物，45%為蛋白質。一般情況下，CEA是由胎兒胃腸道上皮組織、胰和肝細胞所合成，通常在妊娠6個月內CEA含量增高，出生后血清中含量已經很低下，健康成年人血清中CEA濃度小于5μIU/mL。

CEA屬于非器官特異性腫瘤相關抗原，分泌CEA的腫瘤大多位于空腔臟器，如胃腸道、呼吸道、泌尿道等。正常情況下，CEA經胃腸道代謝，而腫瘤狀態時的CEA則進入血和淋巴循環，引起血清CEA異常增高，使上述各種腫瘤患者的血清CEA均有增高。

癌胚抗原（CEA）廣泛存在于內胚葉起源的消化系統癌癥中，如：胃癌、肝癌、胰腺癌以及大腸癌等癌癥中，同時在小細胞肺癌、乳腺癌等癌癥中也有明確的升高，因此，檢測血清中CEA含量對各種癌癥的輔助診斷具有明確的意義。

目前樣本中癌胚抗原的檢測方法主要包括：酶聯免疫法（ELISA）、放射免疫法（RIA）、時間分辨免疫熒光法、膠體金免疫層析法以及化學發光法等多種方法。這些方法的檢測試劑盒都有各自的優缺點如：酶聯免疫法檢測限低，線性范圍較寬，但該檢測試劑盒操作繁瑣，檢測時間長，自動化程度低，受人為因素影響較大；放射免疫法也有檢測限低的優勢，但是由于其檢測過程中需要用到放射性標記物，對操作人員的身體健康存在不良影響，同時對環境也有一定程度的污染，該檢測方法目前已經逐步被其他的技術所替代；膠體金免疫層析法具有檢測迅速，操作方便等優勢，利于病人自行對樣本進行檢測，適用于居家檢測，但該檢測方法不能定量檢測，判讀結果有一定的誤差；化學發光免疫分析技術是進幾年新興的檢測技術，具有操作簡便，自動化程度高，檢測線性范圍寬，檢測限低等諸多優良的特性，是未來生化檢測領域里面技術發展的大趨勢。由于化學發光技術是新興技術，現有的化學發光檢測試劑盒在技術上面存在一些明顯的缺陷和不足:該試劑盒在癌胚抗原檢測過程中檢測的線性范圍很窄、準確性很低、重現性較差，從而對其應用以及檢測帶來不良影響，限制了該技術的推廣應用。

發明內容

本發明的目的是為解決上述問題而提供了一種檢測過程簡單、易于操作、自動化程度高、檢測線性范圍廣、準確性好、重現性好的癌胚抗原磁微?；瘜W發光檢測試劑盒及其檢測方法。

本發明所采用的技術方案是：

一種癌胚抗原磁微?；瘜W發光免疫分析檢測試劑盒，包括癌胚抗原校準品、抗癌胚抗原抗體包被的磁珠、酶標記的單克隆抗體、酶所作用的化學發光底物以及濃縮洗滌液。

優選地，所述癌胚抗原是重組的癌胚抗原或天然的癌胚抗原。

進一步地，所述癌胚抗原校準品的制備方法包括以下步驟：

（1）制備去激素人血清；

（2）將癌胚抗原用去激素人血清配制成濃度為80ng/mL校準品，并將此校準品用去激素人血清稀釋得到濃度分別為40ng/mL、20ng/mL、10ng/mL、5ng/mL的校準品，等量分裝成濃度分別為0ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、40ng/mL和80ng/mL的癌胚抗原校準品。

進一步地，所述抗癌胚抗原抗體包被磁微粒的制備方法包括以下步驟：

（1）磁珠的分散：將磁珠用緩沖液分散；

（2）磁珠的清洗：用緩沖液清洗磁珠后，再用緩沖液重新分散磁珠；

（3）磁珠的活化與連接：取EDC和NHS溶解于步驟（2）所得的磁珠溶液中，攪拌反應后再向反應體系中加入癌胚抗原抗體溶液，攪拌混勻，室溫下攪拌過夜；

（4）磁珠的清洗及封閉：將磁珠與反應體系分離后，用緩沖液洗滌磁珠再用緩沖液重新分散磁珠；向重新分散后的磁珠溶液中加入封閉液封閉，將磁珠與反應體系分離；用緩沖液清洗磁珠后再用緩沖液分散磁珠，得到所述抗癌胚抗原抗體包被磁微。