[發(fā)明專利]一種癌胚抗原磁微粒化學(xué)發(fā)光免疫分析檢測試劑盒及其檢測方法

有效

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• 申請日: 2013-09-17
• 公開（公告）號: CN103472229A
• 公開（公告）日: 2013-12-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 不公告發(fā)明人
• 申請（專利權(quán)）人: 武漢生之源生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/531;G01N21/76
• 代理公司: 北京華沛德權(quán)律師事務(wù)所 11302
• 代理人: 劉杰

1.一種癌胚抗原磁微粒化學(xué)發(fā)光免疫分析檢測試劑盒，其特征在于，包括癌胚抗原校準(zhǔn)品、抗癌胚抗原抗體包被的磁珠、酶標(biāo)記的單克隆抗體、酶所作用的化學(xué)發(fā)光底物以及濃縮洗滌液。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的癌胚抗原磁微粒化學(xué)發(fā)光免疫分析檢測試劑盒，其特征在于，所述癌胚抗原是重組的癌胚抗原或天然的癌胚抗原。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的癌胚抗原磁微粒化學(xué)發(fā)光免疫分析檢測試劑盒，其特征在于，所述癌胚抗原校準(zhǔn)品的制備方法包括以下步驟：

（1）制備去激素人血清；

（2）將癌胚抗原用去激素人血清配制成濃度為80ng/mL校準(zhǔn)品，并將此校準(zhǔn)品用去激素人血清稀釋得到濃度分別為40ng/mL、20ng/mL、10ng/mL、5ng/mL的校準(zhǔn)品，等量分裝成濃度分別為0ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、40ng/mL和80ng/mL的癌胚抗原校準(zhǔn)品。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的癌胚抗原磁微粒化學(xué)發(fā)光免疫分析檢測試劑盒，其特征在于，所述抗癌胚抗原抗體包被磁微粒的制備方法包括以下步驟：

（1）將磁珠用緩沖液分散；

（2）用緩沖液清洗磁珠后，再用緩沖液重新分散磁珠；

（3）取1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺溶解于步驟（2）所得的磁珠溶液中，攪拌反應(yīng)后再向反應(yīng)體系中加入癌胚抗原抗體溶液，攪拌混勻，室溫下攪拌過夜；

（4）將磁珠與反應(yīng)體系分離后，用緩沖液洗滌磁珠再用緩沖液重新分散磁珠；向重新分散后的磁珠溶液中加入封閉液封閉，將磁珠與反應(yīng)體系分離；用緩沖液清洗磁珠后再用緩沖液分散磁珠，得到所述抗癌胚抗原抗體包被磁微。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的癌胚抗原磁微粒化學(xué)發(fā)光免疫分析檢測試劑盒，其特征在于，所述步驟（1）中的磁珠用緩沖液分散，使磁珠的終濃度為60～90mg/mL；所述步驟（2）中用三倍磁珠溶液體積的緩沖液清洗磁珠兩次后，再用緩沖液重新分散磁珠，使磁珠的終濃度為12～24mg/mL；所述步驟（4）中將磁珠與反應(yīng)體系分離后用緩沖液洗滌磁珠兩次，再用緩沖液重新分散磁珠，磁珠的終濃度為20～50mg/mL；向重新分散后的磁珠溶液中加入1%BSA封閉液，室溫封閉3～6小時，將磁珠與反應(yīng)體系分離；再用pH7.4的Tris-HCl緩沖液清洗磁珠兩次后用pH7.4的Tris-HCl緩沖液分散磁珠，使磁珠的終濃度為5～20mg/mL。

6.按照權(quán)利要求4或5所述的癌胚抗原磁微粒化學(xué)發(fā)光免疫分析檢測試劑盒，其特征在于，所述磁珠的粒徑為0.3～1.0μm，所述磁珠為氧化鐵為內(nèi)核、聚苯乙烯表面包裹帶羧基活性基團(tuán)的聚合物，所述緩沖液為MES緩沖液。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的癌胚抗原磁微粒化學(xué)發(fā)光免疫分析檢測試劑盒，其特征在于，所述酶為辣根過氧化物酶，所述酶標(biāo)記的單克隆抗體的制備方法包括步驟如下：

（1）將辣根過氧化物酶溶解于蒸餾水中；

（2）向所述步驟（1）得到的溶液中加入0.1M?NaIO₄溶液，室溫下避光攪拌，得到混合溶液；

（3）將所述步驟（2）得到的混合溶液裝入透析袋中用醋酸鈉緩沖液透析過夜；

（4）向所述步驟（3）得到的透析液中加入碳酸鹽緩沖液至pH值為9.0～9.5，加入癌胚抗原單克隆抗體，混勻，室溫下避光攪拌反應(yīng)；

（5）向所述步驟（4）得到的反應(yīng)產(chǎn)物中加入NaBH₄溶液，混勻，靜置反應(yīng)；

（6）將所述步驟（5）得到的反應(yīng)產(chǎn)物裝入透析袋中于PBS緩沖液中攪拌過夜；

（7）取出透析袋中的液體，在攪拌下逐滴加入等體積的飽和硫酸銨溶液，靜置；

（8）將所述步驟（7）得到的溶液離心，棄上清；將沉淀物用半飽和硫酸銨洗滌后，將沉淀物溶于PBS緩沖液中；

（9）將所述步驟（8）得到的溶液裝入透析袋中透析去除銨離子后，將溶液離心，去除沉淀，上清液即為酶結(jié)合物，加入等體積甘油后混勻分裝，冰凍保存。